Хід визначення.

У скляну пробірку піпетками відміряють 5 мл молока і 2,5 мл буферної суміші, старанно перемішують скляною паличкою, переносять на 3-5 хвилин на водяну баню при температурі 35±2°С. Потім додають 6 крапель 0,5%-ного розчину пероксиду водню і 3 краплі розчину парафенілендіаміну солянокислого, перемішуючи колоподібними рухами вміст пробірки після внесення кожного реактиву. Пробірки знову ставлять на водяну баню і спостерігають за зміною забарвлення рідини.

При відсутності в молоці ферменту пероксидази його колір не зміниться. Якщо молоко в пробірці набуває темно-синього забарвлення, то воно не пастеризоване або пастеризувалося при температурі нижче 80°С, або було змішане з не пастеризованим. Чутливість методу дає можливість визначити домішку не менше 5% не пастеризованого молока до пастеризованого.

7.2.2. Виявлення пероксидази за реакцією з йодисто-калієвим крохмалем

Метод ґрунтується на розщепленні пероксиду водню ферментом пероксидазою з виділенням атомарного кисню, який, окислюючи йодистий калій, звільняє йод, що утворює з крохмалем сполуку синього кольору.

Прилади і реактиви. Прилади, аналогічні методу виявлення пероксидази з парафенілендіаміном солянокислим; 0,5%-ний розчин пероксиду водню; крохмаль картопляний; калій йодистий х.ч. або ч.д.а., дистильована вода; лійки скляні В 56—80ХУ-1; фільтри паперові діаметром 11 см.

Для приготування йодисто-калієвого крохмалю зважують 3±0,01 г крохмалю і змішують з 5-10 мл дистильованої холодної води до одержання однорідної маси. Окремо у колбі доводять до кипіння ЮОмл дистильованої води і, при безперервному помішуванні, доливають воду до розведеного крохмалю, не допускаючи утворення грудочок. Одержаний розчин доводять до кипіння. Після охолодження до розчину крохмалю додають 3 г йодистого калію, перемішуючи до повного розчинення кристалів.

Розчин йодисто-калієвого крохмалю нестійкий, тому його слід готувати у невеликих кількостях, і зберігати в темному прохолодному місці не більше 2 днів. Допускається замість йодисто-калієвого крохмалю використовувати окремо приготовлені 1%-ний розчин крохмалю і 10%- ний розчин калію йодистого.

При використанні йодисто-калієвого крохмалю, який зберігався більше 2 днів, необхідно його перевірити. Для цього у пробірці необхідно закип'ятити 5 мл молока і після охолодження додати 5 крапель йодисто- калієвого крохмалю і 5 крапель 0,5%-ного розчину перекису водню і перемішати. Поява темно-синього або сірувато-синього забарвлення свідчить про непридатність розчину.

Дата добавления: 2015-07-16