Алгоритм использования метода ПНР в диагностике бактериальных ОКИ

Проведенные нами исследования позволили установить, что применение метода ПЦР целесообразно рекомендовать для решения следующих задач клинической диагностики и системы эпиднадзора за ОКИ:

1.Первичное экспрессное обследование лиц, поступающих в инфекционные стационары, при спорадической заболеваемости для выявления основных бактериальных возбудителей ОКИ.

2. Оперативное скрининговое обследование больных и контактных лиц, выявление обсемененности объектов внешней среды, продуктов питания для определения источника, факторов и путей передачи инфекции при расшифровке вспышечной заболеваемости ОКИ.

3. Определение эффективности санитарно-противоэпидемических мероприятий.

4. Выявление труднокультивируемых возбудителей ОКИ,

5.Определение патогенности клинических изолятов энтеропатогенных Escherichia coli, выделенных от больных ОКИ путем обнаружения генов факторов патогенности.

Для решения первых трех задач рекомендуется проведение комплексного ПЦР-исследования на бактерии родов Salmonella, Shigella, Campylobacter и Yersinia enterocolytica по следующей схеме:

1. Выделение нуклеиновых кислот из исследуемого материала (фекалии, ректальные пробы, вода, продукты питания и др.) с использованием комплекта реактивов «Сорб Б» (ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора).

2. Одновременное проведение ПЦР-детекции Salmonella, Shigella, Campylobacter и Yersinia enterocolitica с помощью тест-систем серии AmplySens (ФГУН «ЦНИИЭ Роспотребнадзора»).

3. Электрофоретическая детекция продуктов амплификации с использованием комплекта реактивов «ЭФ-200» (ФГУН «ЦНИИЭ Роспотребнадзора»).

4. Проведение этиотропной терапии в случае обнаружения возбудителей в клиническом материале от больных

5. Контрольное обследование на соответствующий инфекционный агент после завершения лечения.

Для выявления труднокультивируемых возбудителей ОКИ по той же схеме следует проводить ПЦР детекцию бактерий рода Campylobacter. В лабораториях, не имеющих возможности культивировать Yersinia enterocolitica, их также целесообразно выявлять методом ПЦР. Выявление генов факторов патогенности рекомендуется проводить для определения причин тяжелого и особо тяжелого течения ОКИ, вызванных энтеропатогенными эшерихиями и бактериями рода Shigella. Объективный результат может быть получен при исследовании чистых культур возбудителей ОКИ. Следует проводить поиск генов термолабильного, термостабильного, и шигаподобных токсинов 1 и 2 типов с помощью соответствующих тест систем серии Amply Sens (ФГУН «ЦНИИЭ Роспотребнадзора»), используя традиционную схему, предложенную выше. Поскольку на этапе выделения ДНК обработке подвергается бактериальная масса, вместо комплекта «Сорб-Б» может быть использован «Сорб-А».

Таким образом, проведенные исследования позволили получить данные о распространенности наиболее значимых генов факторов патогенности энтеробактерий, подтвердить целесообразность применения ПЦР в диагностике ОКИ и определить наиболее значимые направления и оптимальные варианты использования этой современной технологии (рис. 13, 14).

Выявление труднокультивируемых возбудителей ОКИ;

Первичное обследование лиЦ—

поступающих

в инфекционные

стационары при спорадической

заболеваемости для

выявления

основных бактериальных возбудителей ОКИ.

Обнаружение генов факторов патогенности клинических изолятов Escherichia coli, выделенных от больных ОКИ

ПЦР - детекция возбудителей ОКИ

Оперативное скрининговое обследование лиц, обсемененности объектов внешней среды, продуктов питания для определения источника, факторов и путей передачи инфекции при расшифровке вспышечной заболеваемости ОКИ

Определение эффективности проведенных санитарно противоэпидемических мероприятий.

Рис 13 Основные направления использования ПЦР в клинической диагностике и эпиднадзоре ОКИ.

Рис. 14. Алгоритм использования метода ПЦР в диагностике бактериальных ОКИ

Дата добавления: 2015-07-20