Читайте также:
|
Массовую долю белка чаще всего определяют методом формольного титрования или рефрактометрическим. В арбитражных случаях используют метод Къельдаля.
6.4.1 Рефрактометрический метод
Метод основан на установлении разности показателей преломления луча света после прохождения его через молоко и полученной из него безбелковой сыворотки (для осаждения белков используют раствор хлорида кальция и нагревание пробы).
Аппаратура, материалы, реактивы: рефрактометр ИРФ-464, водяная баня, центрифуга для определения массовой доли жира в молоке, электроплитка, флаконы вместимостью 10 см3, кальций хлористый 2-водный, вода дистиллированная.
Подготовка реактива. Навеску 40 г хлористого кальция помещают в мерную колбу вместимостью 10000см3, приливают к ней 500 см3 воды и перемешивают до полного растворения соли. Содержание колбы нагревают до температуры 20 оС и доводят до метки.
Проведение испытания. Для измерения в 3 флакона наливают по 5 см³ молока, добавляют по 6 капель раствора хлорида кальция. Флаконы закрывают пробками и перемешивают путем переворачивания флаконов. Далее флаконы помещают в водяную баню, наливая воду таким образом, чтобы ее максимальный уровень достигал половины высоты флаконов. Баню закрывают, помещают на электроплитку, воду в бане доводят до кипения и кипятят не менее 10 минут. Не открывая бани, горячую воду сливают через отверстие в крышке, наливают в баню холодную воду и выдерживают в ней не менее 2 минут. Открывают баню, извлекают флаконы и разрушают белковый сгусток путем энергичного встряхивания флаконов.
Флаконы помещают в центрифугу и центрифугируют не менее 10 минут. Образовавшуюся прозрачную сыворотку отбирают пипеткой и наносят на измерительную призму рефрактометра 1-2 капли. Измерительную призму закрывают осветительной.
Наблюдая в окуляр рефрактометра, специальным корректором убирают окрашенность границы света и тени. Для улучшения резкости границы измерение проводят через одну минуту после нанесения сыворотки на призму, так как за это время из пробы удаляется воздух, и поверхность осветительной призмы лучше смачивается.
По шкале «Белок» проводят не менее трех наблюдений. Затем сыворотку с призмы рефрактометра удаляют, промывают ее водой и вытирают фильтровальной бумагой.
На измерительную призму помещают две капли исследуемого молока и по шкале «Белок» проводят не менее пяти наблюдений, так как резкость границы света и тени у молока хуже, чем у сыворотки.
Массовую долю белка в молоке Хб1 (%) вычисляют по формуле:
Хб1=Х1-Х2 (1.7)
где Х1 - среднее арифметическое значение результатов наблюдения по шкале «Белок» для молока, %; Х2 - среднее арифметическое значение результатов наблюдения по шкале «Белок» для сыворотки, %.
За окончательный результат принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать 0,1 %.
6.4.2 Колориметрический метод
Колориметрический метод основан на способности белков молока при рН ниже изоэлектрической точки, связывать кислый краситель, образуя с ним нерастворимый осадок, после удаления которого измеряют оптическую плотность исходного раствора красителя относительно полученного раствора, которая уменьшается пропорционально массовой доле белка.
Аппаратура, материалы, реактивы: весы лабораторные с наибольшим пределом взвешивания 200 г, центрифуга, калориметр фотоэлектрический лабораторный, анализатор потенциометрический, пробирки, краситель «Амидо черный 10Б (1-амидо-2,7 бис(n-нитрофенилазо-8-оксинафталин-3.6-дисульфокислоты динатриевая соль), кислота лимонная х.ч., натрий ортофосфат двухзамещенный, кислота серная, х.ч.
Приготовление буферного раствора. Взвешивают 31,7 г лимонной кислоты и 8,4 г ортофосфата натрия. Растворы помещают в колбу на 500 см3 и добавляют в нее 400 см3 воды. Колбу нагревают до температуры выше 70 оС, перемешивают до полного растворения и охлаждают до 20 оС.
Приготовление раствора красителя. Навеску 4,6 г красителя помещают в колбу вместимостью 500 см3, добавляют 200 см3 воды. Колбу нагревают до температуры выше 70 оС, перемешивают до полного растворения и охлаждают до 20 оС. Раствор фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу на 2000 см3, фильтр промывают водой до полного растворения красителя. В колбу вносят буферный раствор и доводят до метки. Раствор должен иметь рН 2,3 и оптическую плотность 0,82 при длине волны 590 нм и кювете с рабочей длиной 100мм.
Проведение испытания. В пробирку отмеряют 1 см³ молока, приливают 20 см³ красителя и смесь интенсивно перемешивают. Выпавший осадок центрифугируют 10 мин при частоте вращения 15000 об/мин. Отбирают пипеткой 1 см3 надосодочной жидкости, помещают в мерную колбу на 50 см3 и доводят до метки. Аналогично растворяют рабочий раствор красителя.
Полученный фильтрат колориметрируют на фотоколориметре КФК-3 при длине волны 500-600 нм в кювете с рабочей длиной 10 мм.
Массовую долю белков (Хб2) в процентах, определяют по формуле
Хб2 = 7,78 Д – 1,34 (1.8)
Где: Д - измеренная оптическая плотность, ед. оптической плотности,7,78, 1,34 – эмпирические коэффициенты.
6.4.3 Метод формольного титрования
Метод формольного титрования основан на нейтрализации карбоксильных групп моноаминодикарбоновых кислот белков раствором гидроксида натрия, количество которого, затраченное на нейтрализацию, пропорционально массовой доле белка в молоке. Метод применяют при условии согласия с поставщиком.
Аппаратура, материалы, реактивы: колбы вместимостью 1000 см3, натрия гидроокись, 01 моль/дм3, формальдегид, 30 % раствор, фенолфталеин, 1%-ный раствор
Проведение испытания. К 10 см3 свежего молока прибавляют 10-12 капель 1% -ного спиртового раствора фенолфталеина титруют 0,1 моль/дм3 раствором щелочи до слабо-розового окрашивания, не исчезающего при взбалтывании. Затем в пробу добавляют 2 см3 нейтрализованного формалина. Содержимое взбалтывают и перемешивают стеклянной палочкой. Розовое окрашивание, появляющееся при начальном титровании, исчезает. Продолжают титровать пробу щелочью до появления неисчезающего слабо-розового окрашивания. Массовую долю белка б, в процентах, определяют по формуле
Количество раствора щелочи концентрации 0,1 моль/дм3, пошедшее на титрование 10 см3 молока после добавления формалина, умножают на 1,92 и получают содержание общего белка (Хб3) в молоке в процентах:
Xб3 =1,92VK, (1.9)
где V — количество раствора щелочи концентрации 0,1 моль/дм3, пошедшее на титрование 10 см3 молока после доведения формалина, см3;К — поправочный коэффициент раствора щелочи концентрации 0,1 моль/дм3.
Содержания казеина (Хказ) в процентах определяют по формуле:
X = 1,51VK (1.10)
6.4.4 Определение массовой доли белка на анализаторе «Лактон 1-4»
Определение проводят по п. 3.4.2
Дата добавления: 2015-07-16; просмотров: 863 | Нарушение авторских прав
| <== предыдущая страница | | | следующая страница ==> |
| Определение массовой доли сухих веществ методом высушивания | | | Расчетный метод определения белка в молоке |