Показания к проведению исследования: диагностика кишечных инфекций, в том числе брюшного тифа и паратифов (начиная со 2 недели заболевания). Контроль при выписке больных ОКИ из стационара.
Диагностика хронических дисфункций кишечника. Диагностика дисбактериоза кишечника. Выявление бактерионосителей.
Взятие исследуемого материала: исследуемым материалом могут служить испражнения, полученные при естественной дефекации или с помощью ректальных тампонов (петель).
Для сбора материала путем естественной дефекации используют тщательно вымытые и лишенные следов дезинфицирующих средств судна или горшки. На дно судна, для защиты материала от следов дезинфектанта, можно поместить лист чистой бумаги. Пробу испражнений отбирают сразу после дефекации с помощью стерильной стеклянной палочки, проволочной петли или деревянного шпателя. При наличии патологических примесей необходимо выбрать участки, содержащие слизь, гной, хлопья, но свободные от крови.
Получение материала из прямой кишки с помощью ректальных тампонов (петель) осуществляется средним медицинским персоналом. Больного просят лечь на бок с притянутыми к животу бедрами и ладонями развести ягодицы. Петля (тампон) вводится в задний проход на глубину 5-6 см.
Для забора материала используют петли из алюминиевой проволоки (отрезок проволоки длинной около 50 см сгибается пополам) или ватные тампоны на проволочной ручке. Некоторые авторы при исследовании на дизентерию рекомендуют марлевые тампоны, захватываемые корцангом. Ряд зарубежных фирм выпускает специальные устройства для этих целей.
Если планируется проведение исследований на дисбактериоз или ОКИ, обусловленные условно-патогенными бактериями, то материал может быть получен только путем естественной дефекации. По мнению ряда врачей, получение материала путем естественной дефекации является предпочтительным при проведении исследований на кампилобактеры и энтеропатогенные кишечные палочки.
Перед обследованием взрослых на бактерионосительство рекомендуется предварительное назначение солевого слабительного - 25-30 г сульфата магния.
Материал собирают в пустую стерильную посуду или в пробирки с консервантом. При исследовании на дисбактериоз и ОКИ, обусловленные условно-патогенными микроорганизмами консервант не используется. Время до начала бактериологического исследования, если консервант не применяется, не должно превышать 2 часов.
В качестве консервантов (транспортных сред) используют глицериновую смесь, боратно-буферный раствор, фосфатную буферную смесь, а при исследовании на кампилобактериоз - физиологический раствор, 0,1% пептонную воду, тиогликолевую среду. Наиболее универсальным консервантом является транспортная среда Кэри-Блер.
Применение транспортных сред обязательно, если материал забирается с помощью ректального тампона (петли). Важно отметить, что попадание транспортных сред на слизистую прямой кишки недопустимо! Поэтому ректальная петля должна упаковываться отдельно и погружаться в транспортную среду только после взятия материала.
Объем испражнений, вносимых в транспортную среду не должен превышать 1/3 её объема. После внесения пробу перемешивают со средой. Время хранения образцов до начала исследования может составлять до 1 суток в холодильнике, однако оптимальным является проведение посева через 1-2 часа после забора.
Методы исследования. Выбор питательных сред для первичного посева испражнений определяется целью исследования (табл. 17). Вирусологическое исследование испражнений в рутинной практие не используется, однако для обнаружения антигенов наиболее распространенных возбудителей вирусных ОКИ - ротовирусов, широко применяют иммунологические методы: РНГА, реакцию ко-агглютинации и др. Их разработка сделала возможной расшифровку значительной части вирусных диарей в условиях обычных лабораторий.
Наибольшую сложность представляет диагностика острых кишечных инфекций, обусловленных условно-патогенными микроорганизмами. Широкий перечень возможных возбудителей и необходимость оценки количества микроорганизмов в исследуемом материале придают ходу лабораторного исследования в случае подозрения на ОКИ условно-патогенной или смешанной этиологии ряд особенностей:
исследование испражнений на условно-патогенные микроорганизмы должно проводиться обязательно параллельно с исследованием на максимально широкий перечень патогенных бактерий и вирусов;
для индикации возможно большего числа видов бактерий и грибов одновременно проводится посев на среду Эндо, 5% кровяной агар, желточно-солевой агар и агар Сабуро;
с целью определения количества отдельных видов условно-патогенных бактерий посев испражнений на все виды питательных сред проводится методом сектрных посевов (по Gould), анлогичным технике посева мочи.
Таблица 17
Питательные среды для посева испражнений и условия их инкубирования
| Питательная среда | Выделяемые микроорганизмы | Условия инкубации |
| Эндо | Salmonella spp., Shigella spp., Escherichia spp. и другие Enterobacteriaceae | Сутки при 37 оС и сутки при комнатной температуре (для обнаружения Yersinia spp.) |
| Плоскирева | Salmonella spp., Shigella spp., V.parahaemolyticus | 2 суток при 37 оС с просмотром через 24 часа |
| Селенитовый бульон или Мюллера-Кауфмана или магниевая | Salmonella spp. | 18-20 часов при 37 оС |
| Фосфатно-буферный раствор (ФБР) или забуференная пептонная вода или среда Серова или буферно-казеиново-дрожжевая среда | Y.pseudotuberculosis, Y.enterocolitica | До 15 суток и более в холодильнике при 6-10 оС |
| Элективные питательные среды с антибиотиками (Skirrow или Karmali или Blaser или др.) | Campylobacter spp. | 2 суток при 42,5 оС в атмосфере: 5% O2; 10% CO2; 85% N |
| Щелочная пептонная вода и щелочной МПА или СЭДХ или TCBS | V.cholerae | 12-18 при 37 оС |
| Щелочной агар и среда Плоскирева и СЭДХ или TCBS | V.parahaemolyticus | 12-18 при 37 оС |
Для осуществления посева испражнений секторным методом 1 г фекалий растирают в фарфоровой ступке с 9 мл стерильного физиологического раствора, после чего дают суспензии отстоятся 5-10 минут для оседания крупных частиц. Посев исходной суспензии 1/10 и учет результатов проводится также, как при исследовании мочи (метод Gold). Для определения количества бактерий в 1 г испражнений найденное в таблице число умножают на 10.
При бактериологической диагностике дисбактериоза кишечника целью лабораторного исследования является не только выявление микроорганизма - возможного этиологического агента, но и оценка состояния основных физиологических групп микроорганизмов - представителей кишечной микрофлоры. Единой схемы посева испражнений при исследовании на дисбактериоз нет. Выбор питательных сред и, соответственно, спектр определяемых микроорганизмов во многом зависит от возможностей лаборатории. Одна из возможных схем посева испражнений при исследовании на дисбактериоз приведена в таблице 18.
Таблица 18
Посев фекалий при исследовании на дисбактериоз [13]
| Среды | Разведения | Микроорганизмы |
| Мюллера, селенитовая, магниевая | Без разведения | Патогенные энтеробактерии |
| Плоскирева, Левина с синтомицином | 10-1 | |
| Печеночная среда Блаурока | 10-3-10-10 | Бифидобактерии |
| Агар Хенеля (анаэробные условия) | 10-3-10-7 | Бактероиды |
| МРС-4 (анаэробные условия) | 10-3-10-7 | Лактобациллы и стрептококки |
| Среда Калины или ДИФ-3 | 10-3-10-5 - взрослые 10-5-10-7 - дети | Энтерококки |
| Желточно-солевой агар | 10-3-10-5 | Стафилококки |
| Среда Сабуро | 10-3-10-5 | Грибы рода Кандида |
| Среда Левина | 10-3-10-5 | Энтеробактерии |
| Среда Плоскирева | 10-3 | |
| Среда Эндо | 10-5 | |
| Малахитовый агар | 10-1, 10-3, 10-5, 10-7 | Синегнойная палочка |
| Кровяной агар | 10-5, 10-7 | Гемолизирующие культуры |
| Среда Вильсона | 10-3, 10-5, 10-7 | Клостридии |
Дата добавления: 2015-09-06; просмотров: 138 | Нарушение авторских прав
| <== предыдущая страница | | | следующая страница ==> |
| Отделяемое глаз | | | Оценка диагностической значимости полученных результатов. |