Определение аминокислот в пищевых продуктах

Базируется на работах Штейна и Мура, которые в 1958 г. разработали автоматическую систему, позволяющую проводить полный анализ аминокис-лот в течение 24 ч. Впоследствии система, разработанная Муром, позволила сократить время разделения до 90 мин.

Так как ионообменная хроматография относится к типу жидкостной хро-матографии, большую роль играет правильный выбор системы растворителей.

Доказано, что смесь метанол – вода наиболее пригодна для таких целей.

Процесс разделения определяется такими факторами, как рН среды и ион-ная сила раствора.

С появлением аминокислотных анализаторов методика анализа отработана в совершенстве. Сущность ее сводится к следующему:

1. Навеску продукта (мясо, мука) обрабатывают этиловым спиртом до установления четкого разделения фаз (рис. 4.11.).

2. Водную фазу, содержащую аминокислоты, очищают на ионообменной смоле (типа КУ-2).

3. С использованием автоматического аминоанализатора периодически в жидкость, вытекающую из колонки, вводят нингидрин, и нагревают смесь до 100ºС.

Рис. 4.11. Разделение фаз при обработке белкового продукта этиловым спиртом

Нингидрин дает цветную реакцию на α-аминокислоты, поэтому интенсив-ность окраски, фиксируемая колориметром, регистрируется на самописце в виде кривой, точки экстремума которой соответствуют выделяющимся после-довательно кислым, нейтральным и ароматическим аминокислотам.

Общий вид хроматограммы представлен на рис. 4.12.

Качественный анализ основан на сопоставлении интенсивности окраскипродуктов реакции соответствующей кислоты с нингидрином по сравнению с таковой для стандарта (лейцина).

Время, мин

Рис. 4.12. Типовойвид хроматограммы при определении аминокислотного состава краснокочанной капусты: 1 – лизин; 2 – гистидин; 3 – аммиак; 4 - аргинин; 5 – аспарагиновая кислота; 6 – треонин; 7 – серин; 8 – глутаминовая кислота; 9 – пролин; 10 – глицин; 11 – аланин; 12 – цистин; 13 – валин; 14 – метионин; 15 – изолейцин; 16 – лейцин; 17 – тирозин; 18 – фенилаланин; 19 – γ-аминомасляная кислота

При проведении количественного анализа определяют площадь пика S_i для i -аминокислоты (i = 1–19) по формуле (4.5):

S_i = h_i · b_i,

где h_i – высота пика по i -аминокислоте;

b_i – ширина пика по i -аминокислоте на половине его высоты.

Затем рассчитывают содержание (X_i, %) i -аминокислоты в анализируемой пробе по формуле:

, (4.24)

Для определения же количества аминокислот в абсолютных единицах строят градуировочный график по стандарту (лейцину) [5].

Дата добавления: 2015-10-02