Тонкослойная хроматография

Метод тонкослойной хроматографии (ТСХ), получивший широкое распро-странение, был разработан Н.А. Измайловым и М.С. Шрайбер в 1938 г.

Основной характеристикой в ТСХ является подвижность:

, (4.16)

где х ₁ – расстояние от стартовой линии до центра пятна анализируемого компо-нента;

х_f – расстояние, пройденное растворителем за время опыта.

Качественный анализ основан на сопоставлении опытных значений R_f с известными (табличными) значениями подвижности для вещества, полученны-ми при соблюдении фиксированных стандартных условий.

Перспективным приемом для анализа пищевых продуктов является сочета-ние методов ТСХ и ГЖХ, когда выходящая из колонки газовая смесь перено-сится на пластинку ТСХ и анализируется. При этом не только накапливается необходимая информация о составляющих продукта, но и решается вопрос о его химических превращениях в ходе эксперимента.

Рис. 4.5. Образование пятна анализируемого образца в методе ТСХ

○

Рис. 4.6. Определение количества анализируемого вещества по его известной концентрации в центре пятна

Проведение анализа включает следующие процедуры.

На расстоянии 0,5–1,5 см от края пластины, на которую нанесен тонкий слой сорбента (Al₂O₃, SiO₂ и др.), размечают так называемую «стартовую» линию. На нее с помощью микрошприца наносят пробу анализируемого ве-щества в одну точку и пробы стандарта с известной концентрацией того же вещества. Край пластины погружают в стеклянную хроматографическую каме-ру прямоугольного сечения, заполненную растворителем. При движении фрон-та растворителя вдоль пластины за время τ проба анализируемого вещества перемещается на определенное расстояние, которое будет определяться сорб-ционным сродством вещества к материалу, нанесенному на пластину. Анализи-руемое вещество образует пятно определенного размера, учитываемого в по-следующих расчетах (см. рис. 4.5).

Количественный анализ может быть проведен двумя путями:

1. На пластинке.

Берут мелкоразмеченную кальку (или миллиметровку), определяют с ее помощью площадь пятна (S_п) и по градуировочному графику, построенному в координатах С – S_п, находят содержание анализируемого вещества.

Используют специальные приборы – спектроденситометры, позволяющие определить оптическую плотность в центре пятна(D_ц).

Затем по предварительно построенным градуировочным графикам в коор-динатах «стандартная концентрация анализируемого элемента – оптическая плотность в центре пятна» определяют количество анализируемого вещества (С _х), как это показано на рис. 4.6.

Часто денситометрическое количественное определение используют в ме-тоде бумажной распределительной хроматографии.

2. Удаление вещества с пластины.

Вещество механическим путем удаляют после хроматографического разде-ления с пластины и анализируют спектрофотометрически. Содержание компо-нента в смеси определяют по градуировочному графику, построенному в коор-динатах С – D, либо весовым методом.

Дата добавления: 2015-10-02