Иммуноаффинная хроматография

Если на поверхность носителя в качестве аффинного лиганда прививается антитело, полученное против какого-либо белка, то мы имеем дело с иммуноаффинным сорбентом. Антитела высокоспецифичны и имеют очень высокое сродство к белкам-антигенам, что позволяет осуществлять гораздо более избирательную сорбцию, чем на аффинных сорбентах других типов. Взаимодействия между антителом и антигеном характеризуется константой диссоциации порядка 10^-9 – 10^{-12 М, в то время как при обычном аффинном взаимодействии эта константа составляет порядка 10-5} - 10^{-6 М. Это означает, что для разрушения комплекса антитело-антиген приходится использовать весьма жесткие условия на стадии элюирования интересующего белка.}

Один из наиболее распространенных способов разрушения связи антиген-антитело заключается в кратковременном понижении рН элюента до значения 2-3. Антитела обычно хорошо выдерживают достаточно жесткие условия элюирования, что не всегда можно сказать об интересующих белках. Такая же проблема возникает при элюировании связавшихся белков высокой концентрацией хаотропных солей или органических растворителей.

Частично проблема элюирования связавшегося белка может быть решена при использовании моноклональных антител. Можно обнаружить множество различных клонов, продуцирующих антитела к различным антигенным детерминантам интересующего белка и отобрать те из них, которые продуцируют антитела с К_D в области 10^-6-10^{-8 М и тем самым решить проблему с элюированием.}

Дата добавления: 2015-10-02