Читайте также:
|
Гель-фильтрация используется для разделения и количественного определения небольших объемов образца, поскольку при этом не происходит взаимодействия между материалом хроматографической колонки и образцом. Детектирование компонентов, выходящих из хроматографической колонки можно осуществлять непосредственно в процессе разделения, используя физико-химические свойства разделяемых молекул (напр. поглощение при определенной длине волны, оптическую активность или показатель преломления). Кроме того, можно собрать небольшие фракции, выходящие из колонки и затем провести различные физические, химические или биологические тесты для определения интересующих фракций.
Чаще всего гель-фильтрация применяется, когда необходимо провести разделение макромолекул по молекулярным массам, особенно, когда другие методы не позволяют сделать это эффективно. На рис. 12 показано разделение смеси раффинозы, сахарозы и глюкозы друг от друга и отделение от NaСl на носителе Sephadex G-15.
Рис. 12. Разделение олигосахаридов и обессоливание методом гель-фильтрации
Пожалуй, наиболее интересное свойство носителей для гель-проникающей хроматографии заключается в их способности к разделению биомолекул в соответствии с их молекулярными массами. Время (объем) элюирования глобулярных белков коррелирует с их молекулярными массами. Внутри диапазона фракционирования для данного носителя объем элюирования и логарифм молекулярной массы белка почти идеально связаны линейной функцией. Метод гель-фильтрации можно также применять для определения молекулярной массы пептидов, олигонуклеотидов и других макромолекул. Следует отметить, что для каждого типа разделяемых веществ (белки, полисахариды и пр.) существует своя функция, связывающая объем элюирования и молекулярную массу, поэтому необходимо пользоваться соответствующими калибровками.
Дата добавления: 2015-10-02; просмотров: 98 | Нарушение авторских прав
| <== предыдущая страница | | | следующая страница ==> |
| Механизм хроматофокусирования | | | Обессоливание |