Использование ГЖХ для анализа жирорастворимых витаминов в составе масел (жиров)

Метод ГЖХ используется для определения жирорастворимых витаминов – изомерных форм токоферолов (α-, β-, γ-), которые разделяются в виде три-метилсилильных производных (ТМС-эфиров).

Цель такой обработки заключается в снижении сорбционной способности токоферолов путем изоляции ОН-групп на поверхности носителя (целит-545), способных к контакту с реакционноспособными спиртовыми группами токофе-ролов:

│ │ │ │

– Si – O – Si – + Si₂(CH₃)₆HN₂ → – Si – O – Si – + HN₃ ↑. (4.12)

│ │ │ │

HO OH (CH₃)₃SiO OSi(CH₃)₃

При этом дополнительно удаляются и загрязнения с поверхности носителя.

Метод исследования заключается в следующем.

1. Вначале выделяют неомыляемую фракцию из масла путем обработки его спиртовым раствором КОН, экстракции метиловым эфиром и очистки от каротиноидов в колонке с диатомитом;

2. Переводят концентрат токоферолов в ТМС-эфиры;

3. Разделяют токоферолы на хроматографе (неподвижная фаза 10%-й сили-коновый эластомер на целите-545).

Качественную идентификацию проводят по сопоставлении времени удер-живания (τ_R) пиков ТМС-эфиров для каждого изомера токоферолов с временем удерживания внутреннего стандарта (в качестве последнего выступают соевое масло, содержащее α-, β-, γ-токоферолы).

Отношения времен удерживания различных соединений в составе расти-тельного масла и внутренних стандартов сведены в специальные таблицы.

Согласно методу внутреннего стандарта, количественный анализ токофе-ролов (X_i, %) в растительном масле проводят согласно выражению:

, (4.13)

где S_i – площадь пика ТМС – эфира изомера токоферола;

∑ S_i – сумма площадей всех пиков ТМС-эфиров на хроматограмме, при этом

S_i = h_i · b _1/2 · κ, (4.14)

где – полуширина пика;

κ – поправочный коэффициент; при этом.

, (4.15)

где P_вит и P_ст – навески одного из изомеров и стандарта;

S_ст и S_вит – соответствующие площади пиков на хроматограмме.

Дата добавления: 2015-10-02