Макромолекула, состоящая из цепи аминокислот

Б. Приведите три примера белков в составе вашего тела

Антитела, пищеварительные ферменты, белок в составе волос и ногтей (кератин), гормоны, гемоглобин – это все белки

В. Объясните взаимосвязь между генами и белками

Последовательность гена определяет аминокислотный состав белка. Каждый белок во всех клетках нашего тела кодируется одним единственным уникальным геном.

1. Объясните своими собственными словами, что такое «клонирование»

Дупликация и размножение клетки или организма, содержащих идентичный генетический материал.

1. Объясните чем бактериальные клетки в «библиотеке» отличаются от клеток в одной колонии

Библиотека» бактериальных клеток содержит смесь разных генотипов, содержащих разные гены. Клетки в одной колонии генетически идентичны, так как являются копиями одной исходной клетки.

1. Опишите, как бы вы могли выделить белок, излечивающий от рака, из бактерий.

Мы могли бы изолировать одиночную колонию на чашке, и вырастить большое количество бактерий в жидкой культуре. Бактерии из жидкой культуры можно сконцентрировать центрифугированием. После этого бактерии надо лизировать, чтобы нужный нам белок оказался в растворе. Затем можно очистить белок с помощью хроматографической колонки, имеющий сродство к данному белку.

Ответы на вопросы к уроку 2

1. Что такое колония бактерий?

Бактериальная колония это группа клеток, произошедшая от одной клетки.

1. Зачем в работе нужно следующее оборудование:

А. УФ лампа

Зеленый флуоресцентный белок флуоресцирует и становится видимым, когда поглощает ультрафиолетовый свет

Б.Термостат

Термостат создает температуру, благоприятную для роста бактерий

В. Качалка

Качалка создает благоприятную температуру и обеспечивает хорошую аэрацию культуры. Хорошее снабжение кислородом ускоряет рост клеток.

1. Предположите,что произойдет если вы возьмете одну из зеленых колоний с чашки LB/amp/ara и пересеете ее на чашку LB/amp? И наоборот, что произойдет если вы возьмете белую колонию с чашки LB/amp и пересеете ее на чашку LB/amp/ara? Объясните ваш ответ.

Если зеленую колонию пересеять на чашку LB/amp, выросшие колонии будут белыми, т.к. среда не содержит арабинозы, необходимой для включения гена зеленого флуоресцентного белка. Если пересеять белую колонию на чашку LB/amp/ara, колонии будут зелеными, потому что в среде есть арабиноза, которая индуцирует экспрессию GFP.

1. Объясните, как помещение клонированных клеток в питательную среду связано с вашей общей целью выделения GFP.

Для выделения белка нужно нарастить достаточное количество биомассы бактерий. Для этого бактерии выращивают в жидкой среде; чем больше объем среды, тем больше будет биомасса и тем большее количество белка можно будет выделить.

Ответы на вопросы к уроку 3

1. Вы используете бактерий, чтобы наработать зеленый флуоресцентный белок. Назовите функцию оборудования и материалов, которые вы использовали на уроке 3

А. Центрифуга – Используется, чтобы осадить бактериальные клетки и отделить их от среды.

Б. Лизоцим – Используется для ферментативного расщепления бактериальной клеточной стенки, после чего она становится хрупкой и рвется при замораживании.

В. Морозильная камера – Замораживание приводит к увеличению объема цитоплазмы, в результате чего клеточная стенка и мембрана рвутся.

1. Объясните, почему обе («+» и «-») жидкие культуры флуоресцируют зеленым под ультрафиолетом?

Культура, выращенная из зеленой колонии, посеянной в пробирку с надписью «+» светится зеленым, потому что арабиноза, содержащаяся в жидкой среде, продолжает индуцировать экспрессию гена GFP. Культура, выращенная из белой колонии, посеянной в пробирку с надписью «+» также светится зеленым, потому что содержащаяся в среде арабиноза включает работу гена GFP, который был выключен, когда клетки росли на чашке LB/amp без арабинозы.

1. Почему вы отбросили супернатант на этой стадии очистки белка?

Дата добавления: 2015-08-10