Разлейте жидкую питательную среду

Взяв чистую пипетку, разлейте по 2 мл среды в 16 пробирок (добавьте два раза по 1 мл). Храните эти пробирки со средой в холодильнике до тех пор, пока они вам не понадобятся. В наборе содержатся девять дополнительных пробирок. Вы можете наполнить их средой и использовать в демонстрационных целях или как запасные для тех учеников, у которых что-то не получится.

Для урока 2, каждой паре понадобятся две культуральные пробирки, по 2 мл жидкой питательной среды в каждой. В этом уроке ученики инокулируют свои 2 мл культуры трансформантами из набора по трансформации бактерий pGLO.

Замечение: в идеале, культуры должны выращиваться сутки при температуре 32º и перемешиваться в режиме 40-200 об/мин. Перемешивание способствует поступлению кислорода в среду к делящимся клеткам, и чем оно лучше, тем лучше клетки растут. Обычно для этого используется микробиологическая качалка. Можно также плотно закрыть пробирки и поместить их на шейкер внутрь обычного термостата, установленного на 32º. Если такие приборы недоступны, культуры клеток можно встряхнуть вручную в течение 30 сек и потом растить сутки на 32º. Просто пусть ваши ученики потрясут культуры в течение 30 секунд так, как бы они встряхивали баллончик с краской. Чем интенсивнее будет встряхивание, тем лучше будет рост клеток и тем больше GFP образуется. После встряхивания положите пробирки набок внутрь термостата, установленного на 32º на 1-2 дня. Когда пробирки расположены горизонтально, большая поверхность среды находится в контакте с воздухом, что увеличивает диффузию кислорода внутрь клеток. Периодически встряхивайте пробирки в течение двухдневной инкубации.

Если термостата нет, клетки за два дня вырастут и при комнатной температуре. Однако в этом случае надо использовать качающуюся платформу или шейкер. Не рекомендуется растить культуры без перемешивания при комнатной температуре. После требуемого инкубационного периода, культуры инокулированные как белыми, так и зелеными колониями должны выглядеть ярко-зелеными под ультрафиолетовым светом.

Урок 3 Первая стадия очистки: концентрирование и лизис бактерий

Предварительная подготовка

Задачи	Подготовить рабочие места
	Растворить лизоцим
	Подготовить центрифугу
Требуемое время	10 минут

Растворите содержимое флакона с лизоцимом, добавив туда 1 мл ТЕ чистой пипеткой. Аккуратно перемешайте. Сохраняйте раствор на льду или в холодильнике до использования.

Дата добавления: 2015-08-10