Урок 5 Третья стадия очистки

Хроматография белка

1. Возьмите три пробирки для сбора фракций, обозначьте их цифрами от 1 до 3 и поставьте в штатив, (или воткните в кусочек пенопласта). Снимите верхнюю и нижнюю крышки с колонки и поместите ее внутрь первой пробирки для сбора фракций. Излишки буфера будут вытекать, дождитесь, пока верхняя граница буфера не дойдет до верхней границы слоя сорбента.

2. Возьмите новую пипетку и очень медленно и аккуратно налейте 250 мкл содержащего GFP супернатанта на поверхность сорбента. Держите кончик пипетки у стенки колонки, так чтобы образец тек вдоль стенки и поверхность сорбента оставалось как можно более ровной. Посмотрите на колонку под ультрафиолетом. Запишите ваши наблюдения. После того как с колонки перестанет капать, переместите ее в пробирку для сбора фракций #2

3. Используя промытую пипетку, добавьте 250 мкл промывочного буфера. Колонка снова начнет течь. Посмотрите на нее под ультрафиолетом и запишите ваши наблюдения. Когда колонка полностью протечет, переместите ее в пробирку #3

4. Используя промытую пипетку, нанесите на колонку 750 мкл буфера ТЕ. Наблюдайте за процессом под ультрафиолетом. Запишите ваши наблюдения.

5. Осмотрите все три пробирки для сбора фракций и обратите внимание на разницу в цвете. Закройте пробирки или замотайте пленкой и сохраняйте в холодильнике до следующего занятия.

Ответы на вопросы для преподавателей

Ответы на вопросы к уроку 1

1. Белки

А. Что такое белок?

Дата добавления: 2015-08-10