Читайте также:
|
Плазмида pGLO, содержащая ген зеленого флуоресцентного белка, также содержит ген бета-лактамазы, фермента, дающего бактериям устойчивость к антибиотику ампициллину. Бета-лактамаза производится и выбрасывается наружу бактериями, содержащими плазмиду. Секретированная бета-лактамаза инактивирует ампициллин, что позволяет только трансформированным клеткам расти в его присутствии (См. схему ниже).
Регуляция генов
Одна из самых важных концепций работы по трансформации бактерий это концепция регуляции работы генов. Экспрессия зеленого флуоресцентного белка находится под контролем арабинозного промотора. Таким образом, когда бактерии высевались на среду, содержащую арабинозу (LB/amp/ara) экспрессировался GFP и колонии выглядели ярко-зелеными. Напротив, когда бактерии высевались на среду без арабинозы (LB/amp) ген выключался и колонии были белыми (см. Приложение D для дополнительных деталей).
Теперь если взять белую колонию (которая содержит ген GFP, но не экспрессирует его в отсутствие арабинозы) и инокулировать жидкую среду LB/amp/ara, присутствующая в среде арабиноза будет поглощаться клетками и ген GFP заработает. Таким образом, ученики сеют белую колонию со спящим геном GFP в среду,содержащую арабинозу, она включает ген и культура приобретает способность светиться зеленым. Также ученики сеют зеленую колонию в жидкую среду LB/amp/ara, в этом случае ген остается активным и жидкая культура также будет светиться ярко-зеленым.
Дата добавления: 2015-08-10; просмотров: 117 | Нарушение авторских прав
| <== предыдущая страница | | | следующая страница ==> |
| Урок 4 Вторая стадия очистки: удаление бактериального дебриса | | | Гидрофобная хроматография |