Биологическая экспертиза. ных реактивов и проводится в течение относительно короткого вре­мени

ных реактивов и проводится в течение относительно короткого вре­мени. Недостаток же метода - невысокая степень очистки ДНК от белковых примесей.

Второй метод — фенольный, является универсальным, т.е. мо­жет быть применен для выделения ДНК практически из любых объектов. При использовании этого метода происходит наиболее полное удаление белков и различных клеточных компонентов, в ре­зультате чего удается получить ДНК высокой степени очистки, при­годной для длительного хранения. К недостаткам этого метода относится необходимость применения высокотоксичных реактивов, а также потенциальная вероятность потери части ДНК, содержав­шейся в исследуемом объекте.

На втором этапе исследования применяют метод полимеразной цепной реакции для синтеза полиморфных участков ДНК генома человека, выделенной на первом этапе. Использование этого метода позволяет увеличить количество ДНК, необходимое для дальнейшего анализа, без изменения ее качественных характеристик и призна­ков, присущих исходной (матричной) ДНК, выделенной из объекта исследования.

Следующий этап исследования заключается в электрофоретичес-ком анализе продуктов полимеразной цепной реакции. Существуют два основных метода проведения электрофореза фрагментов ДНК: горизонтальный электрофорез в агарозном геле и вертикальный электрофорез в полиакриламидном геле.

Электрофорез в агарозном геле используют, когда не требуется высокого разрешения, т.е. при разделении фрагментов ДНК, разли­чающихся между собой десятками и сотнями пар оснований. Дос­тоинствами метода являются относительная простота технологии электрофореза и отсутствие необходимости в дорогостоящем обору­довании; недостатком - невысокая разрешающая способность элек­трофореза и связанная с этим ограниченность использования его в большинстве случаев экспертного исследования ДНК.

Электрофорез в полиакриламидном геле позволяет детектировать фрагменты ДНК, различающиеся друг от друга на одну пару осно­ваний. Такая разрешающая способность позволяет использовать его при анализе полиморфных последовательностей ДНК, исследуемых при производстве генотипоскопической экспертизы. К недостаткам метода следует отнести необходимость специального оборудования (источника питания высокого напряжения, аппарата для проведе­ния электрофореза), длительность процесса электрофореза, относи­тельно сложную процедуру визуализации фрагментов ДНК на элек-трофореграмме.

Кроме названных методов исследования ДНК, в генотипоскопичес­кой экспертизе может применяться метод дот-блот гибридизации, который используется при анализе полиморфных последовательнос-

ГЛАВА VII. ЭКСПЕРТИЗЫ, ВЫПОЛНЯЕМЫЕ В ЭКП ОВД

тей ДНК, различающихся между собой нуклеотидной последователь­ностью и не отличающихся по своей величине. Анализ таких после­довательностей может быть проведен также методом секвенированиЯ| т.е. прямого установления последовательности нуклеотидов в цепи ДНК. Метод секвенирования состоит из нескольких этапов, которые охватывают, кроме описанных выше выделения ДНК, полимеразной цепной реакции и электрофореза, также реакцию секвенирования с участием флуоресцентномеченных терминаторов цепи.

Возможности экспертизы. Современные методы, используемые в генотипической экспертизе, обладают следующими возможностями.

Методы ДНК-анализа позволяют исследовать микроколичества биологического материала. Теоретически минимальная величина объекта, пригодного для исследования методами ДНК-анализа, со­ставляет лишь одну клетку, однако практически объект должен состоять как минимум из десятков или сотен неразрушенных кле­ток. Такая величина соответствует настолько незначительным раз­мерам, что нередко пригодные для исследования объекты остаются не обнаруженными на месте происшествия. Например, 1 мкл цель­ной крови (1/30 величины минимальной по размерам капли) содер­жит около 50 нг ядерной ДНК, что в 50 раз превышает количество ДНК, необходимое для проведения генотипоскопического исследо­вания.

Объектом экспертизы могут быть любые ткани и биологические жидкости организма человека, содержащие ДНК, при этом допус­тимо их загрязнение микрофлорой, что не оказывает влияния на результаты генотипоскопического исследования.

Генотипоскопическая экспертиза позволяет исследовать следы, содержащие ДНК двух и более лиц. При этом существуют как воз­можности разделения ДНК разных лиц (например, исследуются следы спермы, смешанные с выделениями потерпевшей), так и воз­можности анализа смешанных профилей ДНК.

В процессе исследования изучаются конкретные генетические маркеры (полиморфные локусы ДНК). Сохраненные результаты исследования ДНК пригодны для систематизации, что особенно важ­но при формировании криминалистических учетов, когда необходимо накопление и сохранение данных исследования следов для последу­ющего поиска подозреваемых лиц путем сравнения их данных с уже имеющимися в базе.

Формулирование выводов. По результатам проведения геноти­поскопического исследования формулируются выводы, которые принципиально можно разделить на три основных типа: категори­ческий положительный, вероятный положительный и категоричес­кий отрицательный.

Категорический положительный вывод означает, что исследуемый объект произошел от конкретного лица, генетические признаки

Дата добавления: 2015-07-11