IX. Микробиологическая диагностика туберкулеза

Бактериологическое исследование у лиц с заболеваниями органов дыхания начинается, как правило, в учреждениях общей лечебной сети в клинико-диагностических лабораториях. При обнаружении бактериоскопическим методом кислотоустойчивых микобактерии (более 3 в 100 полях зрения) больной направляется в противотуберкулезный диспансер. В бактериологических лабораториях противотуберкулезных диспансеров проводится комплекс микробиологических методов исследования. Помимо бактериоскопии мазка выполняются все этапы культу рал ьного исследования с целью получения роста возбудителя и его идентификации с последующим определением чувствительности выделенной культуры к противотуберкулезным препаратам. Микробиологической диагностике может подлежать любой биологический и патологический материал, выделенный от больного: мокрота, промывные воды желудка и бронхов, смыв из бронхиального дерева, материал, полученный при бронхо-альвеолярном лаваже, моча, капиллярная и венозная кровь, плевральный и перикардиальный выпот, спинномозговая жидкость; отделяемое из свищей, биоптаты, при­готовленные из операционного материала или полученные при щеточной и щипцевой биопсии. У больных, выделяющих мокроту, собирают ее утреннюю порцию. Правильно собранная мокрота имеет слизистый или слизисто-гнойный характер. Оптимальный объем исследуемой порции мокроты составляет 3-5 мл. Необходимо иметь в виду, что в момент откашливания больным мокроты создается очень высокий риск воздушно-капельного распространения инфекции. В связи с этим необходимо, чтобы сбор мокроты проводили в специальном, хорошо вентилируемом помещении, оснащенном бактерицидными, ультрафиолетовыми лампами и средствами дезинфекции. Сбор мокроты проводится под контролем медицинского работника.

Правила сбора мокроты:

- перед сбором мокроты больной должен хорошо прополоскать

рот водой, чтобы механически удалить основную часть посторонней микробной флоры и остатки пищи, загрязняющие мок роту;

- прикрыть рот и нос куском ткани или носовым платком и откашлять мокроту из глубины грудной клетки. Если больной не может откашлять спонтанно мокроту, необходимо сделать несколько глубоких вдохов и затем задержать дыхание. Несколько аналогичных повторов чаще всего способствуют возникновению кашля;

- поднести контейнер к нижней губе и осторожно высвободить мокроту из полости рта в контейнер, избегая брызг и расплескивания. Затем плотно закрыть контейнер крышкой;

- поместить контейнер в штатив.

При исследовании мокроты желательно собрать не менее 3 проб утренней мокроты в течение 3 дней, что повышает результаты исследования. Если больной не выделяет мокроту, то накануне или рано утром ему следует дать отхаркивающие и муколитические средства или применить раздражающие ингаляции.

Собранный материал необходимо как можно быстрее отправить в лабораторию. При невозможности немедленной доставки материал сохраняется в холодильнике при температуре +4°С не более 48 часов.

Промывные воды бронхов. Сбор материала производится врачом-отоларингологом. Больному несколько раз во время вдоха вводят шприцем в трахею 5-7 мл подогретого стерильного изстоническо-го раствора, который вызывает кашлевой рефлекс. При этом откашливается секрет из глубоких отделов бронхиального дерева. Промывные воды бронхов собирают в стерильный флакон и направляют в бактериологическую лабораторию.

У детей младшего возраста, которые плохо откашливают мокроту и часто заглатывают ее, могут быть исследованы промывные воды желудка. Промывные воды желудка следует брать натощак, перед забором материала больному дают выпить 100,0-150,0 раствора питьевой соды. После этого вводят желудочный зонд и собирают содержимое желудка в стерильный флакон.

Исследование мочи. Моча (средняя утренняя порция) собирается в стерильную посуду после туалета половых органов. Анализ мочи на возбудитель туберкулеза должен проводиться трижды,

Бактсриоскопические методы исследования патологического материала. Сущность метода заключается в способности микобактерий, окрашенных карболовым фуксином, удерживать краситель после длительного обесцвечивания в соляно-кислом спирте.

Методика окраски мазка методом Циля-Нельсена:

• готовят тонкий мазок на предметном стекле, который высушивают при комнатной температуре и фиксируют над пламенем горелки с использованием бесцветного или голубого пламени, располагая стекло мазком вверх;

• на фиксированный препарат накладывают полоску фильтровальной бумаги размером немного меньше предметного стекла, но так, чтобы она закрыла мазок полностью. Фильтровальную бумагу используют для того, чтобы краска не разливалась по стеклу;

• наливают на бумагу приблизительно 5 капель раствора карболового фуксина (фенола по Цилю-Нельсену) и нагревают препарат над пламенем горелки до появления паров, не допуская закипания краски и подсыхания бумага;

• подогретый мазок оставляют на 5 минут;

• после удаления фильтровальной бумаги при помощи пинцета препарат промывают проточной водой или водой из резервуара;

• мазок обесцвечивают в 25% растворе серной кислоты (Н₂30₄) или в 3% соляно-кислом спирте, наливая на него несколько капель до полного обесцвечивания. Продолжительность процедуры обесцвечивания - 2-3 минут;

• повторно мазок промывают проточной водой;

• мазок докрашивают 0,3 % раствором метиленового синего стечение 60 секунд;

• мазок промывают проточной водой;

• мазок высушивают при комнатной температуре в вертикальном положении.

В результате выполненной процедуры кислотоустойчивые микобактерий окрашиваются в малиново-красный цвет, а другие микроорганизмы и клеточные элементы - в голубой. Препарат микроскопируют с масляной иммерсией в световом бинокулярном микроскопе, просматривают не менее 100 полей зрения. Чувствительность микроскопии при окраске мазков по методу Циля-Нельсена составляет 50.000-100.000 бактериальных клеток в 1 мл материала. У больных с остро прогрессирующими формами туберкулеза кислотоустойчивые бактерии можно выявить при их содержании свыше 5.000 микробных тел в 1 мл мокроты (табл. 4).

Таблица 4

Учет результатов микроскопического исследований патологического материала при окраскепо методу Циля-Нельсена

Количество кислото­устойчивых микобактерий	Число иммерсионных полей зрения	Ответ
		качественный	количественный
Отсутствуют 300	отрицательны и 0

1-3		сомнительный	Рекомендовано повторить исследование
1-9		положительный	единичные в препарате, указать число МВТ
10-99	100 положительный единичные в поле зрения (1+)
1-10	1 положительный умеренное количество (2+)
Более 10		положительный	значительное количество (3+)

Микроскопическое обнаружение кислотоустойчивых микобактерий (КУМ) не позволяет дифференцировать m.tuberculosis от нетуберкулезных микобактерий - возбудителей микобактериозов, а следовательно, не позволяет достоверно определить этиологию заболевания.

Дата добавления: 2015-07-12