При оценке лекарственной устойчивости МБТ методом абсолютных концентраций на среде Левенштейна-Йенсена

Наименование препарата	Концентрация мгк/мл
Стрептомицин
Изониазид

Рифампицин
Этамбутол
Биомицин
Канамицин
Протионамид (этионамид)
Циклосерин
ПАСК
Офлоксацин
Амикацин

Ускоренный метод Грисса является модифицированным в ЦНИИТ РАМН (Голышевская В,И., 2002) методом абсолютных концентраций, который позволяет получить адекватный результат резис-тентности выделенных штаммов МВТ на 7-10-й день. Для ускоренного метода определения лекарственной устойчивости МВТ используют определение нитроредуктазной активности с помощью реактива Грисса. Метод пригоден для определения только МВТ человеческого вида {mycobacterium tuberculosis tupus humanus), имеющих в своем соста-ие нитроредуктазу. При наличии в пробирке возбудителя туберкулеза и при добавлении реактива Грисса происходит изменение окраски от малиновой до бурой. При отсутствии МВТ среда цвет не меняет.

Определение лекарственной устойчивости микобактерий туберкулеза на автоматизированной системе ВАСТЕС-460 ТВ и ВАСТЕС МСЗ 960. Кроме классических методов культивирования МВТ на плотных питательных средах в настоящее время в России сертифицированы и нашли свое применение следующие системы культуральной диагностики МВТ и определения лекарственной устойчивости.

ВАСТЕС-460 ТВ и ВАСТЕС МЗЛТ 960 представляют автоматизированную радиометрическую систему для выявления МВТ в диагностическом материале и определения лекарственной устойчивости к основным противотуберкулезным препаратам.

Для роста МВТ в системе используются флаконы с жидкой питательной средой, которая представляет собой обогащенную middelerook 7Н9 бульонную основу, содержащую С 0₂ в пространстве над средой во флаконе. В процессе тестирования газ автоматически забирается из флакона, уровень радиоактивности измеряется и регистрируется в виде индекса роста на шкале от 0 до 999. Результат посева считается положительным, если обнаруживается высокий уровень С¹⁴0₂ во флаконах и замеренная радиоактивность превышает заданный порог Ежедневное увеличение индекса роста пропорционально степени роста МВТ в среде. Наличие микобактериального роста может быть зафиксировано, начиная с 4-5 суток с момента посева, учет результатов производят в течение 6 недель.

Молекулярно-генетический метод анализа. Метод является альтернативным вариантом решения проблемы определения лекарственной устойчивости, основанным на выявлении точечных мутаций или других генетических детерминант, обеспечивающих резистентность к лекарственным препаратам, применяемым в лечении туберкулеза. Время анализа для этих методов составляет 1-2 дня. Существует несколько методических подходов для выявления мутаций ДНК возбудителя туберкулеза.

Одним из новых подходов для решения проблемы быстрого выявления МВТ и определения резистентное к лекарственным препаратам являются биологические микрочипы.

Микрочип представляет собой матрицу, состоящую из ячеек полиакриламидного геля, нанесенных на стеклянную поверхность и содержащих олигонуклеотидные зонды. В силу высокой чувствительно сти биологические микрочипы могут быть использованы для одновременной идентификации возбудителя и определения лекарственной устойчивости к целому ряду лекарственных препаратов с определением типа мутации, ответственной за резистентность.

Было установлено, что тест-система на основе биологических микрочипов способна обнаруживать в образце количество ДНК, соответствующее единичным клеткам.

Контрольные вопросы:

1. Охарактеризуйте правила сбора мокроты для микробиологического исследования на МВТ.

2.Опишите методику окраски мокроты по методу Циля-Нельсена.

3.Дайте характеристику учета результатов микроскопического исследования патологического материала при окраске по методу Циля-Нельсена.

4.Охарактеризуйте тактику врача при получении сомнительного ответа на наличие КУМ в мазке.

5.Какие достоинства имеет люминесцентная микроскопия перед световой микроскопией?

6.Укажите преимущества культу рал ьного метода исследования патологического материала на МВТ.

7.Укажите группы питательных сред, наиболее часто используемых для культивирования МВТ.

8.Охарактеризуйте колонии МВТ на плотных питательных средах (Левенштейна-Йенсена и Финн-Н).

9.Что включают в себя понятия: скудное, умеренное, обильное бактеррювыделение на плотных питательных средах?

10. Опишите основной принцип выявления МБТ радиометрическим методом?

11. Укажите основные достоинства и недостатки биологического метода диагностики МБТ.

12. Что является основой метода ПЦР для выявления МБТ?

13. Охарактеризуйте сущность метода «абсолютных концентраций» для определения лекарственной устойчивости МБТ впатологическом материале.

Дата добавления: 2015-07-12