Валидационная оценка методики анализарибоксинаспектрофотометрическим методом

ВАРИАНТ 1. ПРИ ДЛИНЕ ВОЛНЫ 249 нм (максимум рибоксина)

ВАРИАНТ 2. При длине волны 260 нм.

Изучить УФ-спектр рибоксина

Точную навеску СО рибоксина (около 0,0500г) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в воде, доводят водой до метки и перемешивают (раствор А).

В мерную колбу вместимостью 100 мл вносят 1,0 мл; раствора А и доводят водой до метки (0,001%).

УФ-спектр 0,001% раствора рибоксина в воде очищенной в области

220 – 285 нм имеет максимум поглощения при длине волны 249±2 нм

ЛИНЕЙНОСТЬ

Построение градуировочного графика

Точную навеску СО рибоксина (около 0,05г) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в воде, доводят водой до метки и перемешивают (раствор А).

В мерные колбы вместимостью 100 мл последовательно вносят 0,5 мл; 1,0 мл; 1,5 мл; 2,0 мл; 2,5 мл раствора А и доводят водой до метки (получают 0,0005%; 0,001%; 0,0015%; 0,002% и 0,0025% растворы).

Измеряют оптическую плотность каждого раствора на спектрофотометре при длине волны 249 (или 260) нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Раствор сравнения – вода очищенная.

Строят градуировочный график зависимости оптической плотности от концентрации, рассчитывают уравнение градуировочного графика и коэффициент корреляции. Данные заносят в таблицу 52.

Таблица 52 – Зависимость оптической плотности от концентрации.

Объем раствора А, мл	0,5	1,0	1,5	2,0	2,5
Концентрация полученного раствора, %	0,0005	0,001	0,0015	0,002	0,0025
Оптическая плотность

ПРАВИЛЬНОСТЬ

Приготовить три модельных раствора рибоксина.

Таблица 53 –Приготовление модельных растворов глюкозы.

Модельная смесь	1 (А1)	2 (А2)	3 (А3)
Навеска рибоксина, г	0,150	0,200	0,250
Воды очищенной, мл	до 10 мл	до 10 мл	до 10 мл

Раствор А₁. Точную навеску рибоксина (около 0,15 г) помещают в мерную колбу вместимостью 10,0 мл, растворяют в воде и доводят водой до метки.

Раствор А₂. Точную навеску рибоксина (около 0,2 г) помещают в мерную колбу вместимостью 10,0 мл, растворяют в воде и доводят водой до метки.

Раствор А₃. Точную навеску рибоксина (около 0,25 г) помещают в мерную колбу вместимостью 10,0 мл, растворяют в воде и доводят водой до метки.

Раствор Б₁, В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 2,5 мл раствора А₁ и доводят до метки тем же растворителем.

Раствор Б₂. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 2,5 мл раствора А₂ и доводят до метки тем же растворителем.

Раствор Б₃. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 2,5 мл раствора А₃ и доводят до метки тем же растворителем.

Растворы В₁, В₂, В₃. В три мерные колбы вместимостью 100 мл переносят по 1,0 мл раствора Б₁ и доводят водой до метки.

Растворы В₄, В₅, В₆. В три мерные колбы вместимостью 100 мл переносят по 1,0 мл раствора Б₂ и доводят водой до метки.

Растворы В₇, В₈, В₉. В три мерные колбы вместимостью 100 мл переносят по 1,0 мл раствора Б₃ и доводят водой до метки.

Измеряют оптическую плотность каждого из 9 приготовленных растворов на спектрофотометре при длине волны 249 (или 260) нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора СО рибоксина.

Приготовление раствора СО рибоксина.

Точную навеску рибоксина (около 0,05г) помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в воде, доводят водой до метки и перемешивают (раствор А).

В мерную колбу вместимостью 100 мл вносят 1,0 мл раствора А и доводят водой до метки (раствор Б).

1 мл раствора Б содержит 0,00001 г СО рибоксина.

Расчет содержания рибоксина в процентах (открываемость R) проводят по формуле:

где: А_х – оптическая плотность исследуемого раствора;

А_о – оптическая плотность раствора СО рибоксина;

а_х – масса навески исследуемого образца рибоксина, г (0,15; 0,20 или 0,25 г);

0,00001 – содержание рибоксина в г в 1 мл раствора СО.

Результаты заносят в таблицу №___ и рассчитывают стандартное отклонение (SD) и относительное стандартное отклонение (RSD).

ПРЕЦИЗИОННОСТЬ

Приготовить раствор модельной смеси рибоксина А₂.

Раствор А₂. Точную навеску рибоксина (около 0,2 г) помещают в мерную колбу вместимостью 10,0 мл, растворяют в воде, доводят водой до метки и перемешивают.

Раствор Б₂. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 2,5 мл раствора А и доводят водой до метки.

Затем готовят параллельно по три раствора.

Растворы В₁, В₂, В₃. В три мерные колбы вместимостью 100 мл помещают по 1,0 мл раствора Б и доводят водой до метки.

Растворы В₄, В₅, В₆. В другие три мерные колбы вместимостью 100 мл помещают по 1,5 мл раствора Б и доводят водой до метки.

Растворы В₇, В₈, В₉. В следующие три мерные колбы вместимостью 100 мл помещают по 2,0 мл раствора Б и доводят водой до метки.

Измеряют оптическую плотность каждого из 9 приготовленных растворов на спектрофотометре при длине волны 249 (или 260) нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора СО рибоксина.

Приготовление раствора СО рибоксина (см. выше).

Расчет содержания рибоксина в г/мл проводят по формуле:

где: А_х – оптическая плотность исследуемого раствора;

А_о – оптическая плотность раствора СО рибоксина;

0,00001 – содержание рибоксина в г в 1 мл раствора СО

а-навеска, взятая для анализа,г

V_a – объем аликвоты раствора Б, взятый для разведения (1,0; 1,5; 2,0 мл).

Результаты заносят в таблицу №___ и рассчитывают стандартное отклонение (SD) и относительное стандартное отклонение (RSD).

Дата добавления: 2015-10-21