Введение. Первый московский государственный медицинский университет имени И. М

ПЕРВЫЙ МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ имени И.М. СЕЧЕНОВА

ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ

Круглова Мария Петровна

студентка 5 курса 05-02 группы

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ КАЧЕСТВА ПРЕПАРАТОВ АКТОВЕГИНА ПО ИХ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ

ВЫПУСКНАЯ ДИПЛОМНАЯ РАБОТА

по специальности 060108 65 «Фармация»

квалификация – провизор

Москва, 2014

РАБОТА ВЫПОЛНЕНА НА КАФЕДРАХ:

КАФЕДРА ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ И ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЙ ХИМИИ

зав. кафедрой, доктор фармацевтических наук

профессор Раменская Галина Владиславовна

КАФЕДРА ПАТОЛОГИИ

зав. кафедрой, доктор медицинских наук, академик РАН

профессор Грачев Сергей Витальевич

РАБОТА ВЫПОЛНЕНА НА БАЗЕ:

Лаборатории Экстремальных состояний Научно-исследовательского Центра Первого МГМУ им. И.М. Сеченова

зав. Лаборатории Экстремальных состояний НИЦ, профессор, доктор биологических наук Асташкин Евгений Иванович

НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ:

Доцент Кафедры фармацевтической и токсикологической химии, к.м.н. З.В. Чумакова

Заведующий Кафедрой патологии, академик РАН, профессор, д.м.н С.В. Грачев

Заведующий Лаборатории Экстремальных состояний НИЦ, профессор, д.б.н.

Е.И. Асташкин

Студентка - дипломница

М.П. Круглова

С дипломной работой можно ознакомиться в деканате фармацевтического факультета Первого МГМУ им. И.М. Сеченова (Никитский бульвар,13)

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ.. 5

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ... 8

I.1.Оксидативный стресс. 8

I.2.Реакции образования активных форм кислорода. 9

I.3.Специфичность АФК-реакций. 10

I.4.Эндогенные источники активных форм кислорода. 12

I.4.1.Митохондрии. 12

I.4.2.Ксантиноксидаза. 13

I.4.3.Цитохром Р-450. 14

I.4.4.Никотинамидадениндинуклеотидфосфат-оксидазный ферментативный комплекс 16

I.5.Взаимодействия между различными источниками активных форм кислорода и АФК-зависимая регуляция. 18

I.6.Системы антиоксидантной защиты организма. 19

I.6.1.Ферментативные антиоксиданты.. 19

I.6.2.Неферментные антиоксиданты.. 21

I.7. Мишени активных форм кислорода. Влияние оксидативного стресса на генетические, физиологические и биохимические процессы.. 23

I.7.1.Влияние оксидативного стресса на липиды.. 23

I.7.2.Влияние оксидативного стресса на ДНК.. 24

I.7.3.Влияние оксидативного стресса на белки. 25

1.7.4.Влияние оксидативного стресса на процессы сигнальной трансдукции…………..26

I.8.Роль активных форм кислорода в патогенезе сердечно-сосудистых заболеваний. 27

I.8.1. Острый инфаркт миокарда. Ишемия-реперфузия. 27

I.8.2. Сердечная недостаточность. 28

I.8.3. Характеристика клеточного воспалительного ответа. 29

I.9.Методы анализа активных форм кислорода и препаратов влияющих на уровень их образования 30

I.9.1.Хемилюминесцентный метод анализа активных форм кислорода. 31

I.9.1.1.Собственная хемилюминесценция клеток. 32

I.9.1.2.Активированная хемилюминесценция. 33

I.9.1.2.1. Люминол-зависимая ХЛ клеток. 33

I.9.1.2.2. Люцигенин-зависимая ХЛ клеток. 35

I.10. Изучение комбинированного действия поликомпонентных лекарственных препаратов 36

ГЛАВА II. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ. 38

II.1.Материалы и методы.. 38

II.1.1.Объект исследования. 38

II.1.2.Реактивы.. 38

II.1.3.Исследуемые препараты.. 39

II.1.4.Оборудование. 39

II.1.5. Измерение интенсивности хемилюминесцентной реакции на крови пациентов с хронической сердечной недостаточностью II-III функциональных классов по NYHA.. 41

Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.. 43

III.1.Оценка функциональной активности фагоцитов крови пациентов с ХСН II-III функциональных классов по NYHA на примере образования активных форм кислорода при действии Форбол-12-миристат-13-ацетата (РМА) 43

III.2. Определение оптимальных доз Актовегина и Зифодины, вызывающих максимальный биологический ответ на Форбол-12-миристат-13-ацетат (РМА) 46

III.3.Изучение комбинированного действия препаратов Актовегина и Зифодина на крови пациентов с ХСН II-III функциональных классов по NYHA на примере образования активных форм кислорода при действии Форбол-12-миристат-13-ацетата (РМА) 50

ВЫВОДЫ... 54

ПРИЛОЖЕНИЕ.. 55

Приложение 1. 55

Приложение 2. 61

ЛИТЕРАТУРА………………………………………………………………………………….62

ВВЕДЕНИЕ

На современном этапе применение в клинической практике препаратов, действующих на одну какую-либо патогенетическую мишень, нерационально. Это обусловлено полиэтиологической природой заболеваний, поскольку в их развитии и прогрессировании участвуют сразу несколько патогенетических механизмов, в результате которых активируются несколько сигнальных молекул. В связи с этим представляется верным использование в терапии лекарственных препаратов, в состав которых входят несколько веществ, действующих сразу на несколько патогенетических звеньев. В соответствии с вышесказанным по количеству действующих веществ, входящих в состав лекарственных препаратов, их условно можно разделить на монокомпонентные, комбинированные (2-3 действующих вещества) и поликомпонентные препараты с известным и неизвестным действующим началом. К поликомпонентным препаратам с неизвестным действующим началом относится Актовегин, представляющий собой депротеинизированный диализат крови молочных телят. Препарат содержит широкий спектр низкомолекулярных компонентов клеточной массы и сыворотки крови молочных телят с молекулярной массой до 5000 дальтон: микро- и макроэлементы, аминокислоты, олигопептиды, жирные кислоты, олигосахариды. Актовегин относят к группе биогенных стимуляторов и общетонизирующих препаратов. Он широко применяется в клинической практике, однако свойства его изучены лишь частично. Актовегин положительно влияет на транспорт и утилизацию глюкозы, стимулирует потребление кислорода, а также увеличивает концентрации АТФ и АДФ, таким образом, улучшая трофику тканей. Изначально основной областью применения препарата являлись расстройства когнитивных функций головного мозга. Это связано, прежде всего, с тем, что в его состав входят вещества с низкой молекулярной массой, которые способны проникать через гематоэнцефалический барьер. Однако, положительный клинический опыт применения Актовегина в терапии диабетической полинейропатии, позволил предположить и наличие новых свойств препарата.[54] Полинейропатия – это множественное поражение периферических нервов, проявляющееся периферическими вялыми параличами, нарушениями чувствительности, трофическими и вегетососудистыми расстройствами преимущественно в дистальных отделах конечностей. В патогенезе диабетической полинейропатии лежат как сосудистые, так и метаболические нарушения, которые в конечном итоге приводят к демиелинизации и дегенерации нервных волокон. Результатом этого является нарушение иннервации тканей и органов, а следовательно и их трофики, в результате чего образуются язвы. Образование язв сопровождается гибелью клеток и тканей по механизму некроза, а, следовательно, и воспалительной реакцией. В развитии воспалительного ответа непосредственную роль играют фагоциты крови. Следовательно, возможно предположить, что Актовегин способен влиять на биологическую активность фагоцитирующих клеток, одной из форм которых является образование радикалов кислорода. В настоящее время на Актовегин не существует фармакопейной статьи и каких-либо методов анализа качества и стандартизации, за исключением испытания на пирогенность. Также не представляется возможным изучение фармакокинетических показателей препарата, поскольку он состоит только из физиологических компонентов, которые обычно присутствуют в организме. Несмотря на то, что Актовегин производится строго в стандартных условиях, это не должно исключать возможности проведения процедуры контроля качества данного препарата. В то же время на фармацевтическом рынке существует ряд препаратов - дженериков Актовегина, как, например, препарат Зифодин, производители которого утверждают, что составы их идентичны, что обуславливает еще большую необходимость контроля качества подобных лекарственных препаратов. Так как Актовегин и Зифодин представляют собой сложные поликомпонентные препараты, в состав которых входит большое количество низкомолекулярных компонентов, а действующее начало их неизвестно, в целом это затрудняет процедуру проведения анализа качества. Поэтому с целью определения тождественности состава препаратов, возможно, предложить изучать их комбинированное действие, основываясь на их биологической активности, в частности на способности влиять на уровень образования радикалов кислорода, так как в данном случае использование каких-либо стандартных подходов невозможно.

Цель исследования: Провести сравнительный анализ состава сложных поликомпонентных препаратов Актовегина и Зифодина, основываясь на их биологической активности.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Выбрать объект исследования

2. Выбрать метод исследования биологической активности препаратов

3. Изучить способность препаратов Актовегина и Зифодина влиять на уровень радикалов кислорода 4. Изучить комбинированное действие препаратов Актовегина и Зифодина, основываясь на их способности влиять на уровень образования радикалов кислорода

Дата добавления: 2015-07-15