Окраска на белок

Стекла заливают 1 М NaCl и инкубируют в течение дня, чтобы удалить следы неспецифического взаимодействия.

Затем стекла промывают несколько раз дистиллированной водой для удаления соли.

Стекла помещают на поднос на фильтровальную бумагу. На фильтровальной бумаге под каждым стеклом подписывают его номер. На каждое стекло сверху кладут кусочек фильтровальной бумаги, размер которого соответствует размеру стекла. В течение 36 часов гель высушивают в термостате при +37С.

Стекла погружают вертикально с помощью пинцета в емкость с краской и окрашивают в течение 15-30 секунд.

Отмывают в растворе для отмывки до тех пор, пока четко не проявятся линии преципитации.

Затем стекла высушивают на фильтровальной бумаге.Если подписи стекол отмылись во время окрашивания необходимо снова их подписать.

Раствор для отмывки после использования необходимо регенерировать на угольном фильтре.

Результаты:

Выводы:

Результаты выявления антигенов в различных образцах:

Образец	Лф	МПО
сыворотка молока человека	++++	----
сыворотка молока коровы	+---
сыворотка молока козы	++--
слезы №1	++++	+---
слезы №2	++
слюна	+---	+---
экстракт белков лейкоцитов №1	++++	++++
экстракт белков лейкоцитов №2	++	+++-
экстракт белков лейкоцитов №3	+-	+++-

Появление двух и более полос преципитации может говорить о том, что в анализируемых сыворотках присутствуют антитела к нескольким антигенам содержащимся в образце, что произошло смещение геля, что произошла диссоциация субъединиц МПО (обе обладают антигенностью, но только одна обладает пероксидазной активностью). Чем ближе полоса преципитации к лунке, содержащей исследуемый образец, тем меньше данный образец содержит выявляемого антигена. Но если антигена очень мало, то полоса преципитации не образуется.

Рисунок. Двойная иммунодиффузия в геле.
Иммуноцитохимическое выявление миелопероксидазы и лактоферрина в клетках крови человека

Дата добавления: 2015-07-20