Читайте также:
|
Нитроцеллюлозную мембрану инкубировали в блокирующем буфере в течение 30 минут при +37°С, при перемешивании (в термостате, на качалке).
Происходит блокирование свободных участков мембраны, не занятых белками после переноса. Это препятствует неспецифическому связыванию антител с мембраной.
Дважды ополаскивали буфером для промывки. Затем инкубировали мембрану в растворе антигена (1 мкг/мл) в течение 60 минут при +37°С в термостате на качалке. Тщательно отмывали от несвязавшегося антигена буфером для промывки 3 раза по 5 минут на качалке при комнатной температуре.
Мембрану инкубировали в растворе первичных антител, конъюгированных с пероксидазой хрена, разведенных в 300 раз, в течение 60 минут при +37°С, при перемешивании (в термостате на качалке). Тщательно отмывали от несвязавшегося коньюгата буфером для промывки 3 раза по 5 минут на качалке при комнатной температуре.
Мембрану споласкивали водой и инкубировали в растворе субстрата, не допуская прямого попадания яркого света, наблюдая за развитием окраски. Реакцию останавливливали промыванием мембраны дистиллированной водой и высушивали на воздухе.
Рис. 1. Мембраны, окрашенные красителем Понсо (мембраны 1, 4, 1’, 4’)
Рис. 2. Мембраны 2, 2’, 3, 3’, 5, 5’, 6, 6’
Дата добавления: 2015-07-20; просмотров: 140 | Нарушение авторских прав
| <== предыдущая страница | | | следующая страница ==> |
| Ход работы | | | Ход работы |