Студопедия
Случайная страница | ТОМ-1 | ТОМ-2 | ТОМ-3
АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатика
ИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханика
ОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторика
СоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансы
ХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника

Ход работы. На установленном горизонтально столике для заливки размещают стекла и заливают

Читайте также:
  1. B. Опубликованные работы
  2. Ftp\DPP\Регламент работы магазина.
  3. HR– менеджмент: технологии, функции и методы работы
  4. I. Задания для самостоятельной работы
  5. I. Задания для самостоятельной работы
  6. I. Задания для самостоятельной работы
  7. I. Задания для самостоятельной работы

На установленном горизонтально столике для заливки размещают стекла и заливают горячий раствор 1% агарозы, 3 мл на стекло. Толщина геля при этом получается 1-2 мм.

В застывшем геле с помощью пробойника формируют лунки (1 лунка в центре, 6 – по кругу).

Стекла помещают на фильтровальную бумагу в чашки Петри.

Объем вносимых проб - 20 мкл.

 

ц – центральная лунка

1 – 6 лунки

 

 

I. Титрование сывороток

I.1) Титрование сывороток к лактоферину (Лф): в центральную лунку вносят Лф (0,5 мг/мл), в лунку 1 вносят сыворотку к Лф №1 или сыворотку к Лф №3, в остальные – сыворотку в различных разведениях (последовательные разведения в 2 раза: в лунку 2 сыворотку к Лф, разведенную в 2 раза буфером для разведения проб, в лунку 3 – в 4 раза и т.д.). Стекла I-1 и I-3.

I.2) Титрование сывороток к миелопероксидазе (МПО): в центральную лунку вносят МПО (0,5 мг/мл), в лунку 1 вносят сыворотку к МПО №2 или сыворотку к МПО №4, в остальные – сыворотку в различных разведениях (последовательные разведения в 2 раза: в лунку 2 сыворотку к МПО, разведенную в 2 раза буфером для разведения проб, в лунку 3 – в 4 раза и т.д.). Стекла I-2, I-4, I-2-ДАБ и I-4-ДАБ, 2 стекла для окраски гелей кумасси, 2 – для выявления пероксидазной активности МПО с помощью диаминобензидина (ДАБ).

II. Тестирование образцов на наличие антигена (данные образцы и сыворотки вносятся в исходной концентрации).

II.1А) В центральную лунку вносится сыворотка к Лф №1 или сыворотка к Лф №3, в лунку 1 – экстракт белков лейкоцитов №1, в лунку 2 – сыворотка молока человека, в лунку 3 - сыворотка молока коровы, в лунку 4 - сыворотка молока козы, в лунку 5 – слезы №1, в лунку 6 – слюна. Стекла II-1А и II-3А.

II.1В) В центральную лунку вносится сыворотка к Лф №1 или сыворотка к Лф №3, в лунку 1 – экстракт белков лейкоцитов №1, в лунку 2 – экстракт белков лейкоцитов №2, в лунку 3 – экстракт белков лейкоцитов №3, в лунку 4 – слезы №1, в лунку 5 – слезы №2, в лунку 6 – слюна. Стекла II-1В и II-1В.

II.2) В центральную лунку вносится сыворотка к МПО №2 или сыворотка к МПО №4, в лунку 1 – экстракт белков лейкоцитов №1, в лунку 2 – экстракт белков лейкоцитов №2, в лунку 3 – экстракт белков лейкоцитов №3, в лунку 4 – слезы №1, в лунку 5 – слюна, в лунку 6 – сыворотка молока человека. Стекла II-2, II-4, II-2-ДАБ и II-4-ДАБ, 2 стекла для окраски гелей кумасси, 2 – для выявления пероксидазной активности МПО с помощью ДАБ.

III. В центральную лунку вносится экстракт белков лейкоцитов №1, в лунки 1 и 6 - сыворотка к Лф №1, в лунки 2 и 5 - сыворотка к МПО №2, в лунку 3 - сыворотка к Лф №3, в лунку 4 - сыворотка к МПО №4. Стекла III и III-ДАБ, одно стекло для окраски геля кумасси, второе – для выявления пероксидазной активности МПО с помощью ДАБ.

 

Иммунодиффузия идет в течение ночи при комнатной температуре во влажной камере (необходимо смочить водой фильтровальную бумагу в чашке Петри, и таким образом, получаем влажную камеру). Стекла и чашки Петри необходимо подписать, чтобы впоследствии не перепутать.

Вынимаем фильтровальную бумагу из чашек Петри.

 


Дата добавления: 2015-07-20; просмотров: 93 | Нарушение авторских прав


Читайте в этой же книге: Ход работы | Ход работы | Результаты. | Аффинная хроматография | Иммунохимическая окраска мембраны после проведения электропереноса. | Реактивы | Ход работы |
<== предыдущая страница | следующая страница ==>
Иммунохимическая окраска мембран| Окраска на белок

mybiblioteka.su - 2015-2024 год. (0.008 сек.)