I.9.1.2.2. Люцигенин-зависимая ХЛ клеток

Обнаружение супероксидного радикала в живых клетках - чрезвычайно важно из-за ведущей роли этого радикала в редокс-сигнализации внутри клетки и в развитии большого числа патологических состояний. В силу высокой чувствительности люцигенина в качестве ХЛ-зонда на супероксидный радикал, люцигенин-активируемая ХЛ (LC-ХЛ) использовалась для обнаружения O2 ^-· при окислении ксантина или гипоксантина ксантиноксидазой, НАДФН-оксидазой клеток-фагоцитов, и чувствительными к дифенилениодониуму НАДФН-оксидазами клеток эндотелия, фибробластов и гладкомышечных клеток стенок кровеносных сосудов.

Реакция LC-ХЛ протекает в несколько этапов.(см.Рис.7)

Рисунок 7. Схема реакции люцигенин-зависимой хемилюминесценции.

Первая из этих реакций – образование катион-радикала (⋅Luc+) из люцигенина, который в нейтральном водном растворе представляет собой двухвалентный катион (Luc2+). Взаимодействие катион-радикала люцигенина с супероксидом приводит к образованию нестойкого соединения – люцигенин диоксетана (Luc=O). При спонтанной реакции распада Luc=O образуются две молекулы N-метилакридона, одна из которых оказывается в электронно-возбужденном состоянии. Из схемы следует, что скорость хемилюминесцентной реакции зависит не только от концентрации O2^-•, но и от скорости реакции одноэлектронного восстановления люцигенина.[1,2] Однако, существует несколько нюансов в использовании люцигенина как адекватного люминофора при определении O2^-•, на том основании, что в определенных условиях люцигенин может сам быть источником супероксидных радикалов в реакции его одноэлектронного окисления кислородом воздуха. В концентрации до 50 мкМ люцигенин адекватно отражает уровень радикалов кислорода. Поэтому использование LC-ХЛ метода для определения супероксида в химических и биологических системах представляется возможным.

Дата добавления: 2015-07-15