Фракционирование и очистка белков

Фракционирование и очистка белков основаны на различиях в их физико-химических свойствах: молекулярной массе, растворимости, изоэлектрическом состоянии, высаливании и др. К методам фракционирования и очистки белков

относятся:

· Высаливание – белки ступенчато осаждают из раствора добавлением различных концентраций насыщенных растворов нейтральных солей, характерных для каждого белка.

· Изоэлектрическое осаждение – белки последовательно осаждают из раствора изменением изоэлектрической точки-pI, характерной для каждого белка путем добавления кислого или щелочного буфера.

· Осаждение органическими растворителями – белки последовательно осаждают путем добавления разных, но невысоких (4-8 %-ных) концентраций спирта или другого органического растворителя при низких температурах (+4 ^о С).

· Ионнообменная хроматография – разделение белков на колонках с ионообменными смолами: ионитами, основанное на электрохимических свойствах белков, способности их к ионизации. Разделяемые белки соединяются с кислыми или щелочными группами ионитов ионной связью с различной силой в зависимости от заряда белка и затем последовательно вымываются буферными растворами с различным рН.

· Гель - фильтрация – метод разделения и очистки белков, основанный на различии в молекулярной массе белков. Осуществляется на колонках с гелем полисахарида декстрана с определенным размером пор. Белки с большой молекулярной массой проскакивают между гранулами геля и вымываются из колонки первыми, а низкомолекулярные белки или примеси входят в поры геля и поэтому выходят последними (рис. 9).

Рис. 9. Схема разделения белков гель-фильтрацией: А – смесь нанесена

на колонку; Б – середина процесса; В – крупные молекулы выхо-

Дата добавления: 2015-07-15