Дят из колонки первыми

Метод гель-фильтрации также применяют для определения молекулярной массы разделенных белков, заранее построив график зависимости величины молекулярной массы выбранных стандартных белков от их объемов, выходящих из колонки.

· Электрофорез – разделение белков основано на различной скорости перемещения белков в электрическом поле, что определяется их разным зарядом (рис. 10). Величина заряда белка зависит от его аминокислотного состава, то есть от количества положительно или отрицательно заряженных функциональных групп аминокислот.

Рис. 10. Схема электрофореза белков в полиакриламидном геле (ПАГ)

· Диализ – метод разделения и очистки белков от низкомолекулярных примесей, основан на явлении осмоса и неспособности крупных молекул белка проходить через поры полупроницаемых мембраны. За счет разности осмотических давлений и внутри диализатора низкомолекулярные частицы, например соли, выходят из диализатора, а белки остаются внутри его.

Диализом можно разделить водорастворимые и солерастворимые белки. Так как солерастворимые белки нерастворимы в дистиллированной воде, то по окончании диализа они выпадают в осадок.

После разделения и очистки проверяют чистоту выделенного белка. Для этой цели, используя различные физико-химические методы, определяют для выделенного и очищенного белка:

- температуру кипения и плавления;

- удельный вес;

- показатель преломления;

- молекулярную массу;

- наличие характерных функциональных групп, например СООН-групп;

- растворимость;

- электрофоретическую подвижность;

- однородность вещества

1.5. КЛАССИФИКАЦИЯ БЕЛКОВ

Дата добавления: 2015-07-15