Определение белка методом Кьельдаля

Метод основан на окислении органического вещества при сжигании его в концентрированной серной кислоте в присутствии катализатора, отгонке образующегося аммиака паром, улавливании его раствором серной кислоты и определении содержания азота методом титрования.

Реакции протекают по уравнениям:

RCHNH₂COOH + H₂SO₄ ® CO₂ + SO₂ + H₂O + NH₃;

2NH₃ + H₂SO₄® (NH₄)₂SO₄;

(NH₄)₂SO₄ + 2NaOH ® 2NH₃ + 2H₂O + Na₂SO₄;

2NH₃ + H₂SO₄ ®(NH₄)₂SO₄ + H₂SO₄.

Оборудование, материалы, реактивы: весы аналитические, весы технические, колбы Къельдаля, мерные цилиндры на 25 см³, отгонные колбы на 500 см³, парообразователь, водяной холодильник, плита электрическая, колбы плоскодонные на 250 см³; кислота серная плотностью 1840 кг/м³, кислота серная 0, 1 н раствор, гидроксид натрия 33 %-ный раствор, гидроксид натрия 0,1 н раствор, медный купорос кристаллический, индикатор метиловый красный, универсальный индикатор РКС.

Проведение испытаний. Н авеску пробы 0,2 г, взвешенную с погрешностью не более 0,001 г, помещают в колбу Къельдаля и ведут минерализацию. С этой целью в колбу приливают 5 см³ серной кислоты плотностью 1840 кг/м³ и добавляют несколько кристаллов медного купороса (0,2-0,3 г). Затем колбу с содержимым осторожно нагревают в вытяжном шкафу, не допуская разбрызгивания жидкости. Когда содержимое колбы станет однородным, прекращают нагревание, дают остыть, добавляют 0,5 г сернокислого калия и продолжают нагревать до тех пор, пока жидкость в колбе не станет прозрачной, зеленовато-голубой окраски без бурого оттенка. Внутренние стенки колбы должны быть совершенно чистыми.

По окончании сжигания содержимое колбы охлаждают и количественно переносят в отгонную колбу вместимостью 500-750 см³. Колбу для сжигания тщательно ополаскивают, проверяя полноту смывания добавлением 1-2 капель раствора метилового красного. Общий объем раствора в отгонной колбе не должен быть более 200-250 см³.

Приемником служит коническая колба вместимостью 200-300 см³, в которую из бюретки налито 25 см³ 0,1 н раствора серной кислоты. Конец трубки холодильника должен быть погружен в раствор серной кислоты.

В отгонную колбу осторожно, по стенке, приливают 50 см³ 33 %-го раствора гидроксида натрия, бросают кусочек лакмусовой бумаги и быстро закрывают ее пробкой, соединенной посредством каплеуловителя с холодильником, содержимое осторожно перемешивают и нагревают. Реакция среды в колбе должна быть резко щелочной. После закипания жидкости в отгонной колбе приемник опускают так, чтобы конец трубки холодильника находился на некотором расстоянии от поверхности раствора, и продолжают отгонку до тех пор, пока не отгонится не менее 2/ 3 жидкости.

Окончание отгонки проверяют по лакмусовой бумаге. Если отгонка закончена, капля дистиллята не должна вызывать посинения универсального индикатора РКС.

По окончании отгонки конец трубки холодильника обмывают водой в приемную колбу и содержащийся в ней избыток серной кислоты оттитровывают 0,1 н раствором гидроксида натрия в присутствии метилового красного.

Одновременно проводят контрольный анализ без навески исследуемого образца.

Количество общего азота в сырье (Х) в процентах вычисляют по формуле:

Х = , (2.1)

где V₁ - объем 0,1 н раствора гидроксида натрия, израсходованный на титрование серной кислоты в контрольном опыте, см³; V₂ - объем 0,1 н раствора гидроксида натрия, израсходованный на титрование серной кислоты в рабочем опыте, см³; m – навеска сырья, г; К - коэффициент пересчета на точный 0,1 н раствор гидроксида натрия; 0,0014-количество азота, эквивалентное 1 см³ 0,1н раствора гидроксида натрия, г.

Дата добавления: 2015-08-18