Реакция преципитации в агаре.

Реакция преципитации в агаре (предложенная Уденом и разработанная Аухтерлони) используется для изучения состава сложных антигенных смесей, обнаружения состава сложных общих антигенов микроорганизмов, для контроля степени очи­стки биологических препаратов.

Антиген и антитела (имеющие различную дисперсность) за определенный промежуток времени проходят в агаре различные расстояния, создавая при этом постепенно убывающие концен­трации. При встрече соответствующих антигенов и антител в зо­не оптимальных концентраций образуются видимые простым глазом белые линии преципитата. Антиген, вступая во взаимо действие с гомологичным антителом, образует только одну ли­нию преципитата, при участии в реакции нескольких антигенов и антител каждая система ведет себя независимо друг от друга, число образующихся зон преципитации равно или меньше коли­чества присутствующих в растворе систем антиген - антитело.

Реакция преципитации, представляет собой метод качест­венного анализа и позволяет изучать антигенный состав бакте­риальных препаратов.

Различают следующие методы постановки реакции преципи­тации

а) метод простой диффузии, при котором одно реагирующее вещество (обычно антиген) диффундирует в агар, содержа­щий постоянную концентрацию другого реагирующего ве­щества, - иммунную сыворотку;

б) метод двойной диффузии, при котором антиген и антитело, движутся навстречу друг другу через нейтральный слой ага­ра.

Метод простой диффузии. Агар, приготовленный для по­становки реакции преципитации, растапливают в водяной бане. К расплавленной и охлажденной до температуры 45-50°С среде приливают равное количество преципитирующей сыворотки, смесь осторожно перемешивают, и разливают в чашки Петри.

После застывания агара устанавливают матриксы в количест­ве, соответствующем числу исследуемых антигенов, наливают еще один слой агара высотой 3-4 мм. После застывания которого матриксы вынимают. Образую­щиеся лунки в среде заполняют исследуемыми антигенами и чашки на 3-5 час. оставляют при комнатной температуре, а затем сохраняют в холодильнике при 3° С в течение 10-14 дней.

При положительном результате реакции на 7-10-й день после постановки опыта появляются зоны преципитации мутно-белого цвета в форме концентрических окружностей, распо­ложенных вокруг лунок. Диаметр кольца преципитации пропорционален концентрации антигена. Реакцию используют, в частности, для определения содержания в крови иммуноглобулинов различных классов, компонентов системы комплемента

Метод двойной диффузии. В стерильные чашки Петри на­ливают 2% агар без добавления сыворотки, устанавливают мат­риксы и наливают второй слой среды.

Одну лунку заполняют преципитирующеи сывороткой, в другую вносят антиген. Чашки хранят при комнатной темпера­туре или в холодильнике в течение 2 нед. Растворимые антигены и сыворотка диффундируют в окружающий агар во всех направ­лениях.

При положительном результате реакции по линии контакта между двумя диффундирующими веществами происходит реак­ция преципитации, внешним проявлением которой служит воз­никновение между лунками, заполненными сывороткой и анти­геном, поперечной полоски молочно-белого цвета.

При использовании в опыте сложных антигенных смесей в агаре, разделяющем лунки, образуется спектр линий. Число ли­ний соответствует числу пар антиген – антитело. Реакцию Аухтерлони можно использовать для определения токсичности бактерий, титра антител, активности стандартных диагностикумов или иммунных специфических сывороток

Дата добавления: 2015-09-05