Иммунофлюоресцентный метод

Ре­акция иммунофлюоресценции — РИФ (метод Кунса) основана на том, что антигены тканей или микроорганиз­мы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, ме­ченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах лю­минесцентного микроскопа (прямой метод). Бактерии в мазке, обработанные такой специфической сывороткой, светятся по пе­риферии клетки в виде каймы зеленого цвета. Различают три основные разновидности метода: прямой, непрямой, непрямой с комплементом.

Иммунофлюоресцентный метод чаще применяется для ка­чественной характеристики биоматериала с целью обнаружения конкретного микроорганизма, конкретной клетки. Метод имму-нофлюоресценщш может проводиться в прямом и непрямом ва­риантах. Для обнаружения искомого вещества используется лю­минесцентный микроскоп.

В качестве флюоресцентной метки используют красители: изотиоцианат (сине-зеленый), родаминсульфохлорид (оранжево-красный) и др.

При прямом флюоресцентном методе Кунса специфиче­ские флюоресцирующие антитела взаимодействуют с гомологич­ными антигенами микроорганизмов, в результате образуются иммунные комплексы антиген-антитело и при люминесцентной микроскопии регистрируют свечение. Недостаток метода - при­готовление флюоресцирующих специфических антител против каждого выявляемого антигена.

Непрямой метод имеет преимущество не только в более вы­сокой чувствительности, но и в отсутствии необходимости полу­чать меченые антисыворотки различной специфичности.

Специфические немеченые антитела связываются с антиге­ном и выявляются с помощью флюоресцирующих антииммуноглобулиновых антител против иммуноглобулинов вида, которому принадлежат специфические данному антигену антитела.

Свечение, выявляемое при люминесцентной микроскопии, обусловлено фиксацией флюоресцирующих антиглобулиновых антител на иммунном комплексе антиген-специфическое антите­ло.

Дата добавления: 2015-09-05