Читайте также:
|
|
Постановка развёрнутой реакции агглютинации объёмным способом.
Для постановки реакции агглютинации требуются компоненты:
1) сыворотка крови, подлежащая исследованию, в количестве 0,1-0,2 мл;
2) изотонический раствор хлорида натрия;
3) корпускулярный антиген, взвесь живых или убитых бактерий (диагностикум).
Приготовление разведений сыворотки больного. Из исследуемой сыворотки готовят ряд последовательных двукратных разведений, чаще всего от 1:50-1:100 до 1:1600-1:3200. В отдельной пробирке готовят первое, основное, разведение сыворотки, обычно 1:50 или 1:100. Основное разведение сыворотки используют для приготовления ряда последовательных разведений.
Две последние пробирки ряда предназначены для контроля антигена и сыворотки (КА - контроль антигена и КС - контроль сыворотки)
Последнее разведение сыворотки, в котором наблюдается агглютинация, считают ее титром.
Условия: строгое участие и подбор всех компонентов
Во все пробирки, за исключением первой и последней (КС), наливают по 1 мл изотонического раствора хлорида натрия. Затем из пробирки с основным разведением сыворотки (например, 1: 100) берут З мл и наливают по 1мл в 1-ю, 2-ю и в последнюю пробирку (КС). Далее 1 мл содержимого 2-й пробирки переносят в 3-ю, из 3-й пробирки такое же количество - в 4-ю, из 4-й - в 5-ю. Из 5-й пробирки (последняя опытная) 1мл содержимого выливают в банку с дезинфицирующим раствором для сохранения одинакового объема (1мл) во всех пробирках.
Таким образом, разведение сыворотки в первой пробирке соответствует основному ее разведению (1:100); в последующих пробирках получается ряд последовательных двукратных разведений: 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600.
По окончании разведений во все пробирки ряда, за исключением КС, прибавляют по 1-3 капли антигена, содержащего 2 млрд. живых или убитых микробных тел в 1 мл. После этого жидкость в пробирках становится слегка мутноватой.
После добавления антигена к разведенной сыворотке штатив с пробирками встряхивают для лучшего перемешивания сыворотки с изотоническим раствором хлорида натрия, ставят на 2 ч в термостат при 37 °С, а затем учитывают предварительный результат реакции. Окончательный результат регистрируют через 18-20 ч. Нахождения пробирок при комнатной температуре. Положительный результат реакции агглютинации характеризуется образованием на дне пробирки осадка с выраженным просветлением надосадочной жидкости. Остаток на дне пробирки, образовавшийся, в результате склеивания микробных тел, называется агглютинатом.
Механизм реакции основан на взаимодействии детерминантных групп антигена с активными центрами иммуноглобулина в электролитной среде. Реакции протекают в две фазы - соединение антигена с антителом, вторая фаза - выделение в осадок образовавшегося комплекса АГ+АТ. Характер осадка зависит от природы антигена: жгутиковые бактерии дают крупнохлопьевый осадок, безжгутиковые и бескапсулярные - мелкозернистый, капсульные – тяжистый.
Учет результатов реакции агглютинации начинают с просмотра контрольных пробирок. Реакция может считаться положительной лишь в том случае, если в пробирках с контролями жидкость остается совершенно однородной, в КА - слегка мутной, в КС - прозрачной.
Для регистрации результатов реакции агглютинации пользуются четырехкрестной системой обозначения:
+ + + + полная агглютинация, при которой большой осадок на дне располагается кучкой или в форме открытого перевернутого зонтика, надосадочная жидкость в пробирке совершенно прозрачна,
+ + +почти полная агглютинация, осадок такой же, как
в предыдущем случае, жидкость почти прозрачная,
+ +слабая агглютинация, небольшой осадок, жидкость непрозрачная
+отмечают следы агглютинации, осадок едва заметен, жидкость непрозрачная,
—отрицательная реакция, содержимое пробирок равномерно мутное, без осадка, по виду неотличимо от содержимого пробирки КА.
Реакцию агглютинации используют для определения антител в сыворотке крови больных, например при брюшном тифе и паратифах (реакция Видаля), бруцеллезе (реакции Райта, Хеддлсона), туляремии и других инфекционных болезнях, а также для определения возбудителя, выделенного от больного. Эта же реакция применяется для определения групп крови.
Дата добавления: 2015-09-05; просмотров: 1746 | Нарушение авторских прав
<== предыдущая страница | | | следующая страница ==> |
Авторские программы на радио, их разновидности. | | | Определение серологического типа выделенного микроба. |