Определение группы крови системы АВО цоликло_нами анти_А, анти_В и анти_АВ

Оснащение: по одной серии цоликлонов анти_А, ан-ти_В и анти_АВ во флаконах со своими маркированными «анти_А», «анти_В» и «анти_АВ» пипетками; исследуе-мая кровь в пробирке с обозначением фамилии и иници-алов лица, которому она принадлежит; тарелка или план-шетка со смачиваемой поверхностью; изотонический ра-створ хлорида натрия; спирт; вата; карандаш; часы; ре-зиновые перчатки.

Техника определения:

• определяют пригодность цоликлонов анти_А, анти_В, анти_АВ к работе. Раствор цоликлона анти_А должен иметь розовый цвет, анти_В — синий, цоликлон ан-ти_АВ — бесцветный. Флаконы цоликлонов должны быть закрыты резиновыми пробками, соответствовать сроку годности;

• карандашом делят планшетку на три сектора с обо-значением их «анти_А», «анти_В» и «анти_АВ». По краю тарелки подписывают фамилию и инициалы лица, которому определяется группа крови;

• пипеткой «анти_А» наносят одну большую каплю цо-ликлона анти_А на часть планшетки, обозначенной «ан-ти_А». Пипеткой «анти_В» — такую же каплю цоликло-на анти_В на вторую часть тарелки, пипеткой «анти_ АВ» — на часть тарелки, обозначенной «анти_АВ»;

• в длинную стеклянную пипетку набирают исследуемую кровь и наносят по одной маленькой капле (1:10) ря-дом с каплями цоликлонов антй_А, анти_В и анти_АВ;

2. Переливание крови

• капли тщательно перемешивают отдельными стеклян-ными палочками;

• результат реакции оценивают через 3 минуты (рис. 2.5).

Оценка результатов:

• агглютинации нет ни с одним из трех цоликлонов. Исследуемая кровь О (I) группы;

• агглютинация наблюдается с цоликлонами анти_А и анти_АВ. Исследуемая кровь А (II) группы;

• агглютинация определяется с цоликлонами анти_В и анти_АВ. Исследуемая кровь В (III) группы;

• агглютинация наблюдается со всеми тремя цоликло-нами. Исследуемая кровь АВ (IV) группы.

Запомнить! В случае положительной реакции агглю-тинации эритроцитов со всеми тремя цоликлонами, т. е.

Рис. 2.5 Определение группы крови системы АВО цоликлонами анти-А, анти-В, антн АВ:

а — группа крови 0(1); б — группа крови А(П);

в — группа крови В(Ш); г— группа крови AB(IV)

42 Общехирургические навыки

установления АВ (IV) группы, с целью исключения спон-танной неспецифической агглютинации, необходимо про-вести дополнительное контрольное исследование данного образца крови с изотоническим раствором хлористого на-трия. Для этого на отдельной тарелке смешивают одну большую каплю изотонического раствора хлорида натрия с маленькой каплей исследуемой крови. При отсутствии агглютинации в этой контрольной капле исследуемая кровь принадлежит AB(IV) группе. При положительной реак-ции следует повторить определение группы крови с при-менением отмытых эрироцитов данного образца крови.

Определение резус-фактора

Определение резус_принадлежности заключается в вы-явлении в эритроцитах людей антигена D системы резус.

При каждом исследовании для проверки специфично-сти и активности сыворотки анти_резус необходимо ста-вить контроль. Для контроля применяются стандартные резус_положительные эритроциты группы О (I) или той же группы, что и исследуемая кровь, и стандартные ре-зус_отрицательные эритроциты.

Используются следующие способы определения резус_ принадлежности:

1) определение резус_принадлежности при помощи стандартного универсального реагента (в пробирках без подогрева);

2) определение резус_принадлежности реакцией кон_ глютинации с применением желатина в пробирке с подо-гревом 46_48 °С;

Определение резус_принадлежности при помощи стан-дартного универсального реагента (в пробирках безподогрева)

Оснащение: универсальный реагент антирезус —анти_D во флаконе; исследуемая кровь без стабилизатора

2. Переливание крови

в пробирке с подписанными фамилией, инициалами и группой крови лица, которому она принадлежит; 33% полиглюкин; стандартные Rh+ и Rh_ эритроциты для контроля; лупа с двух_четырехкратным увеличением; шта-тив для пробирок; длинная стеклянная пипетка с рези-новой грушей; чистые пробирки вместимостью 10 мл; ка-рандаш; часы; изотонический раствор хлорида натрия во флаконе; резиновые перчатки.

Техника определения:

• на двух стеклянных пробирках подписывают фами-лию, инициалы лица, кровь которого исследуется. Про-бирка № 1 устанавливается в первый ряд штатива, про-бирка под № 2 — во второй ряд (контрольный ряд);

• подписывают еще две пробирки, одну — «стандартные Rh + эритроциты», вторую — «стандартные Rh _ эрит-роциты» и устанавливают их в 1_й ряд штатива;

• в пробирки № 1 и № 2 при помощи длинной стеклян-ной пипетки на самое дно помещают по одной капле (0,05 мл) исследуемых эритроцитов;

• в пробирки «стандартные Rh+ эритроциты» и «стан-дартные Rh _ эритроциты» добавляют по одной капле соответствующих эритроцитов;

• на дно всех пробирок первого ряда длинной стеклян-ной пипеткой вводят по две кйпли (0,1 мл) стандарт-ного универсального реагента антирезус;

• на дно пробирки второго ряда добавляют две капли (0,1 мл) изотонического раствора NaCl и 1 каплю (0,05 мл) 33% раствора пОлиглюкина;

• содержимое пробирок перемешивают встряхиванием, а затем медленно поворачивают по оси, наклоняя по-чти до горизонтального положения так, чтобы содер-жимое растекалось по стенкам;

• через 3 минуты во все пробирки добавляют 2_3 мл фи-зиологического раствора, перемешивают содержимое

44 Общехирургические навыки

двух_трехкратным перевертыванием пробирок, не встряхивая, и оценивают результат (рис. 2.6).

Оценка результатов. Пробирки просматривают на светневооруженным глазом или через лупу. Оценка резус_ принадлежности исследуемых эритроцитов определяется результатом реакции агглютинации в пробирке N° 1.

Кровь считается резус_положительной при появлении агглютинатов и отрицательной — при их отсутствии.

Окончательные результаты учитывают как истинные только после проверки контрольных образцов, подтвер-ждающих специфичность и активность сыворотки анти-резус, т. е. при отсутствии агглютинации со стандартны-ми резус_отрицательными эритроцитами и наличии аг-глютинации со стандартными резус_положительными эритроцитами одноименной группы или группы О (I). В пробирке второго ряда (контрольный ряд) агглютинации быть не должно. Наличие агглютинации в пробирке кон-трольного ряда свидетельствует о неспецифичности реак-ции. При этих условиях положительный результат с сы_

Рис. 2.6 Определение резус-принадлежности при помощи стандартного универсального реагента (в пробирках без подогрева):

а — резус-положительная кровь; б — резус-отрицательная кровь

2. Переливание крови

вороткой антирезус (в пробирке № 1) не может быть уч-тен как истинный. В таких случаях рекомендуется от-мыть исследуемые эритроциты теплым изотоническим ра-створом NaCl для элюирования с них аутоантител и по-вторить исследование. В сомнительных случаях для оп-ределения резус_принадлежности следует применить ме-тод агглютинации в солевой среде, используя сыворотку с полными антителами.

Определение резус_принадлежности реакцией конг_

Дата добавления: 2015-07-11