Опыт 3. Метод ТСХ.

На подготовленную пластинку для ТСХ «Силуфол» с помощью хроматографического шприца или капилляра наносят гидролизат в виде точки, рядом (с обеих сторон от точки гидролизата) наносят пробы свидетелей – раствор мальтозы и раствор глюкозы (при проведении исследований веществ с предполагаемым составом, применяют метод хроматографирования со свидетелем - известным веществом). Линию финиша отмечают, отступив 5 мм от верхнего края пластинки.

L =а-в (смотри рисунок), L0 =а-б (смотри рисунок).   Рисунок 1. Хроматограмма. Линия а-а – линия старта, б-б – линия фронта растворителя (линия финиша), в – линии, отвечающие центру пятен вещества. А – точка нанесения раствора глюкозы; Б – точка нанесения раствора гидролизата; В – точка нанесения раствора мальтозы.

Пластинку вертикально помещают в камеру, которая заполнена разделяющей смесью до высоты 5 мм. Состав разделяющей смеси: н -бутанол – уксусная кислота – вода (60 мл – 15 мл – 25 мл). Пластинку выдерживают в камере до тех пор, пока высота подъема фронта восходящего растворителя не достигнет отмеченной длины разделительного пути (линия финиша).

По окончании хроматографического разделения пластинку вынимают из камеры и сушат при комнатной температуре в вытяжном шкафу до полного испарения остатков растворителей.

Затем разделение повторяют в той же системе растворителей. Высушенные пластинки погружают в реагент, представляющий собой смесь: н -бутанол – водоуксусная кислота – фосфорная кислота – анилин – дифениламин (60 мл – 25 мл – 15 мл – 10 мл – 1 мл – 2 г). Пластинки снова сушат и проявляют в термостате при температуре 120⁰С в течение 5 мин.

Идентификацию продуктов гидролиза проводят с помощью свидетелей и по значениям R_f. Данные заносят в таблицу 3.

Таблица 3.

№ п/п	Название компонента смеси	Rf	Цвет пятна
	Декстрины
	Мальтоза
	Глюкоза

Контрольные вопросы.

1. Роль моно-, олиго- и полисахаридов в пищевых продуктах.

2. В каких пищевых технологиях используется гидролиз полисахаридов?

3. Кислотный гидролиз крахмала. Какие продукты образуются при гидролизе? Недостатки кислотного гидролиза.

4. Гидролиз крахмала амилолитическими ферментами: a- и b-амилазами, глюкозоамилазой. Особенности ферментативного гидролиза крахмала.

5. Какую окраску с йодом дают крахмал, декстрины, мальтоза и глюкоза?

6. На чем основано хроматографическое разделение смеси веществ? Что такое элюент? Как рассчитывается величина R_f?

7. Приведите классификацию углеводов.

8. Охарактеризуйте восстанавливающие и невосстанавливающие дисахариды.

9. Приведите строение и гидролиз крахмала

10. Какова пищевая и энергетическая ценность углеводов.

Дата добавления: 2015-10-16