Реакция иммунофлюоресценции

Имеются два варианта постановки (РИФ): прямая и непрямая (рис. 32). Прямая РИФ – простая реакция, но для ее постановки требуется большое количество меченых антимикробных сывороток. Непрямая РИФ – более сложная реакция, но поставить ее можно имея только одну меченую сыворотку. При этом антиген вначале обрабатывают обычной иммунной специфической сывороткой, а затем к иммунному комплексу антиген–антитело прибавляют меченную флюоресцеинизотиоцианатом (ФИТЦ) антисыворотку к антителу этого комплекса. Обычно индикация антигена (микроба) на первом этапе проводится иммунной кроличьей сывороткой, тогда на втором этапе используется меченная ФИТЦ антикроличья сы­воротка, полученная путем иммунизации гамма–глобулинами кроликов, ослов или других животных.

Постановка прямой РИФ: на обезжиренном предметном стекле из исследуемого материала делают тонкие мазки, а из органов и тканей – мазки–отпечатки. Их подсушивают, фиксируют, наносят на мазки взятую в рабочем разведении люминесцирующую сыворотку и помещают во влаж­ную камеру при температуре 37 °С на 20–30 мин. Затем, чтобы удалить избыток флюоресцирующих антител, их промывают (10–15 мин) в забуференном изотоническом растворе натрия хлорида с последующим опо­ласкиванием (10 мин) в дистиллированной или проточной воде. Сушат препараты при комнатной температуре. Исследуют в люминесцентном микроскопе с использованием иммерсионного объектива. Интенсивность флюоресценции в виде зеленого ободка вокруг бактерий оценивают по четырехбалльной шкале: «++++» – очень яркая; «+++» – яркая; «++» –выраженная ободочная флюоресценция; «+» – слабое свечение клеток.

Рис 32. Реакция иммунофлюоресценции. а – прямая, 6 – непрямая

Дата добавления: 2015-09-02