Реакция агглютинации

Агглютинацией называется склеивание бактерий при действии на них специфических антител в присутствии электролита. Ее используют.

1) для определения вида и серовара выделенных бактерий (серотипаж),

2) для обнаружения антител в сыворотке крови больного (серодиагнос­тика).

Для постановки реакции агглютинации (РА) необходимы три компо­нента: антиген (агглютиноген), антитело (агглютинин) и электролит (изотонический раствор натрия хлорида). В качестве антигена в РА применяют взвеси живых и убитых бактерий (диагностикумы).

Для получения агглютинирующих сывороток обычно иммунизируют кроликов. При этом им 5–7 раз подкожно, а затем внутривенно с интервалами 2–7 суток в возрастающих дозах вводят взвесь убитых, а в конце – 2 – 3 раза живых бактерий. Через неделю после иммунизации определяют титр сыворотки, или максимальное ее разведение, которое агглютинирует гомологичный микроорганизм. Если титр сыворотки не­достаточен, иммунизацию продолжают. Полученные таким образом аг­глютинирующие сыворотки называются неадсорбированными, поскольку содержат групповые агглютинины и могут в небольших разведениях склеивать родственные в антигенном отношении бактерии. Поэтому для определения вида бактерий надо ставить развернутую реакцию с сыво­роткой, разведенной от 1:100 до ее титра. Сыворотка соответствует микроорганизму в том случае, если как минимум агглютинирует его до половины титра.

Рис. 29 Реакция агглютинации: а – пластинчатая; б – развёрнутая.

Более достоверные результаты при определении вида или серовара бактерий дают адсорбированные (монорецепторные или типоспецифические) сыворотки, которые не имеют групповых агглютининов, вслед­ствие чего нет необходимости разводить их. Реакцию агглютинации в них ставят на предметном стекле.

Ориентировочная, или пластинчатая, реакция агглютинации. Ориен­тировочную РА выполняют перед постановкой развернутой реакции для того, чтобы отобрать на среде агглютинирующиеся в сыворотке колонии бактерий (культуры) и исключить из дальнейших исследований неагглютинирующиеся. Ставят ее при комнатной температуре на предметном стекле (рис. 29,а). Для этого на его поверхность пастеровской пипеткой раздельно наносят 2–3 капли различных сывороток в разведениях 1:10–1:20 и кап­лю 0,5 % раствора натрия хлорида (контроль РА). В каждую каплю за исключением контрольной вносят подозрительные колонии (петлю куль­туры) и тщательно перемешивают до равномерного помутнения.

Результаты реакции учитывают через несколько минут невооружен­ным глазом или с помощью лупы (х5). При положительной реакции в каплях с сывороткой появляются крупные или мелкие хлопья, при от­рицательной – жидкость остается равномерно мутной.

Дата добавления: 2015-09-02