Реакция агглютинации для серодиагностики инфекционных болезней.

При использовании РА для выявления в сыворотке больных антител к соответствующему патогенному микробу или, как кратко говорят, в целях серодиагностики берут 5 мл крови, получают сыворотку и разводят ее изотоническим раствором натрия хлорида от 1:50–1:100 до 1:800–1:1600, так как в более низких ее титрах могут находиться нормальные агглютинины, имеющиеся у здоровых людей или у больных с другим диагнозом.

В качестве антигена в этой реакции используют заведомо известные взвеси убитых микроорганизмов (диагностикумы), с которыми безопасно работать

РА для серодиагностики ставится и учитывается так же, как и раз­вернутая РА для определения вида бактерий. Диагностическое значение имеют титры 1:100–1:200 и выше.

Более достоверные результаты дает выявление нарастания титра ан­тител в парных сыворотках, полученных от больного в начале заболе­вания и спустя 3–5 суток и более, когда титр агглютининов повышается под воздействием находящегося в организме патогенного микроба.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА). Ставится для обнару­жения полисахаридов, белков, экстрактов бактерий, микоплазм, риккетсий и вирусов, иммунные комплексы которых с агглютининами в обыч­ных классических РА увидеть не удается, или же для выявления антител в сыворотках больных к этим высокодисперсным веществам и мельчай­шим микроорганизмам.

РНГА для серодиагностики инфекционных болезней. Используя РНГА для обнаружения антител в сыворотках больных, готовят эритроцитарные антигенные диагностикумы. Для этого эритроциты обрабаты­вают 15 мин раствором танина в разведении 1:20 000–1:200 000, что придает им устойчивость и повышает адсорбционную способность. Затем их смешивают с известным антигеном и инкубируют в течение 2 ч при температуре 37°С.. Сенсибилизированные антигеном эритроциты 2–3 раза отмывают 0,85 % раствором натрия хлорида и в количестве 0,10– 0,25 мл 0,5 % взвеси добавляют к сыворотке, разведенной от 1:10 до 1:1280 и разлитой по 0,25–0,50 мл в луночки плексигласовых панелей. Контролем служат взвеси интактных и нагруженных антигеном эритро­цитов, которые вносят в сыворотки, дающие заведомо положительную и отрицательную реакции.

Результаты реакции учитывают через 2 ч после инкубации в термостате и оценивают плюсами: «++++» – эритроциты равномерно покрывают всю лунку пластинки в виде зонтика с неровными краями; «+++», «++» –осадок эритроцитов в виде зонтика, в центре небольшое кольцо из осадка эритроцитов в виде зонтика, в центре небольшое кольцо из несклеивающихся эритроцитов; «+» – в основном несклеивающиеся эрит­роциты; «–» – скопление эритроцитов в виде маленького диска («пу­говицы»).

РНГА для выявления высокодисперсных антигенов. Готовят двукрат­ные разведения антигена в объеме 0,25–0,5 мл и к каждому из них добавляют 0,10–0,25 мл эритроцитов, сенсибилизированных антителами известной иммунной сыворотки. Результаты РНГА учитывают через 2 ч после инкубации в термостате и оценивают теми же плюсовыми значе­ниями.

Дата добавления: 2015-09-02