Назовите этапы приготовления гистологических препаратов

1. Уплотнение кусочков, необходимое для приготовления срезов, производится путем пропитывания предварительно обезвоженного материала парафином, целлоидином, органическими смолами или методом замораживания кусочков, например в жидкой углекислоте.

2. Приготовление срезов на микротоме или ультрамикротоме с помощью специальных ножей. После этого срезы для световой микроскопии приклеиваются на предметные стекла, а для электронной — монтируются на специальные сеточки.

Приготовление срезов (парафиновых и целлоидиновых) производят с помощью специальных приборов-микротомов (санные и ротационные) из замороженных кусочков- с помощью криотомов. Парафиновые, целлоидиновые и замороженные срезы имеют толщину 4-20 мкм, полутонкие – 1-2 мкм, ультратонкие – 400-800 нм.

Рисунок 1.6. – Микротом (прибор для приготовления срезов) (по R. V. Kristic):

1 – нож; 2 – парафиновый блок с заключенным в него образцом; 3 – срез; 4 – подающее устройство

Рисунок 1.7. – Ротационный микротом.

Блоки, содержащие кусочки органа, закрепляют в подвижном обьектодержателе. При его опускании на нож остаются серийные срезы, их снимают с ножа и монтируют на предметное стекло для последующей обработки и микроскопирования.

3. Окрашивание срезов (в световой микроскопии) или напыление их солями металлов (в электронной микроскопии) применяют для увеличения контрастности изображения отдельных структур при рассматривании их в микроскопе. Методы окраски гистологических структур очень разнообразны и выбираются в зависимости от задач исследования.

Окрашивание срезов позволяет выявлять разнообразные микроструктуры клеток и тканей, повышать их контрастность. Микроструктуры, отличающиеся по своим физико-химическим свойствам, по-разному воспринимают красители.

Импрегнация – метод выявления структур клеток и тканей, основанный на различной их способности удерживать или восстанавливать соли тяжелых металов (серебро, свинец, осмий, золото).

4. Заключение срезов позволяет длительное время сохранять препарат, его окраску, прозрачность и структуру. Обычно срезы заключают в канадский бальзам, предварительно произведя обезвоживание в спиртах возрастающей крепости.

15. Какие Вы знаете виды красителей?

Гистологические красители подразделяют на кислые, основные и нейтральные.

Основные красители –соли оснований (гематоксилин, метиловый синий, толлуоидиновый синий, азуры, тионин и др.), связываясь с кислотными соединениями гистологических структур, вызывают их контрастирование окрашиванием в синий цвет. Структуры, воспринимающие основные красители, называют базофильными.

Кислые красители (пикриновая кислота, эозин, эритрозин, конгорот, оранж и т.д.), связываясь с основными соединениями гистологических структур, вызывают их контрастирование в цвета красителя (красного, желтого, оранжевого и зеленого). Структуры, воспринимающие кислые красители, называют оксифильными.

Нейтральные красители содержат как основные, так и кислые красящие компоненты. Структуры, воспринимающие нейтральные красители, называют нейтрофильными.

Структуры, хорошо окрашивающиеся кислыми красителями, называются оксифильными (ацидофильными, эозинофильными), а окрашивающиеся основными — базофилъными.

Структуры, воспринимающие как кислые, так и основные красители, являются нейтрофильными (гетерофильными).

Окрашенные препараты обычно обезвоживают в спиртах возрастающей крепости и просветляют в ксилоле, бензоле, толуоле или некоторых маслах. Для длительного сохранения обезвоженный гистологический срез заключают между предметным и покровным стеклами в канадский бальзам или другие вещества. Готовый гистологический препарат может быть использован для изучения под микроскопом в течение многих лет. Для электронной микроскопии срезы, полученные на ультрамикротоме, помещают на специальные сетки, контрастируют солями марганца, кобальта и др., после чего просматривают в микроскопе и фотографируют. Полученныемикрофотографии служат объектом изучения наряду с гистологическими препаратами.

Дата добавления: 2015-10-30