Род Бруцеллы

Возбудители бруцеллеза имеют систему ассимиляции эритри-тола—основного источника углевода и энергии для бактерий дан­ного вида (Румянцев С. Н., 1983). Бруцеллы относятся к аминоге-терогенным микроорганизмам, требующим для обеспечения рос­та наличия свободных аминокислот в качестве источника азота (Кондратьева О. В., 1968). Поскольку наиболее богаты по амино­кислотному составу белки животного происхождения, до настоя­щего времени в практических лабораториях преимущественно используются питательные среды на их основе. Из субстратов животного происхождения чаще всего применяются мясо, пе­чень, селезенка (Аверкиева Р. С, Ременцова М. М., 1968). В со­став многих сред для культивирования бруцелл входит кровь, ча­ще сыворотка (Колесникова Н. С, 1961; Альтон Дж., Джонс Л., 1968).

Особый интерес с экономической точки зрения представля­ет применение тех компонентов крови, которые до сих пор не использовались или использовались не полностью. Грушина Т. А. и соавт. (1978) предлагают для выращивания бруцелл козье-

овечьего, свиного и, в меньшей степени, бычьего видов приме­нять (3-глобулиновые среды на основе гидролизата (J-глобулино-вой фракции (отход производства у-глобулина) с аминным азо­том 200—250 мг%. Эти среды рекомендуются и для бактериоло­гической диагностики бруцеллеза у людей, так как с их помощью выделяется в 2,4 раза больше гемокультур, чем на ши­роко применяемой мясо-пептонной среде. Затраты при этом со­кращаются на 53,8%. Предлагается также использование твина-40 и твина-60 для повышения ростовых качеств сред, поскольку установлена способность бруцелл разных видов их гидролизо-вать (Рыкова В. И., Домарадский И. В., 1963).

Другие авторы рекомендуют для повышения ростовых ка­честв сред, помимо твинов, заменяющих сыворотку крови жи­вотных, использовать глюкозу и глицерин. Предлагается также в качестве основы сред гидролизат из китобойной муки, отходов плацентарной и абортной крови, экстрактов куриного эмбриона и ворсинок плаценты (Смирнова В. И., 1960,1962; Мухарвер Р. В. и соавт., 1961; Бабушкин И. Н., 1964; Gardini G., Domini M., 1954; Williams A. et al., 1962). Ишанова Р. Ж. и соавт. (1978) по­казали возможность замены мясных настоев гидролизатами кро­ви, печени, селезенки и плаценты крупного и мелкого рогатого скота.

Ускорению роста бруцелл способствует введение в среду, со­держащую агар-агар, глюкозу, глицерин, хлорид натрия и воду, веществ, в которых присутствует аминный азот: неполных пан­креатических гидролизатов казеина и придатков с семенниками, а также аминокислоты L-цистина (Бедарева 3. М. и соавт., 1983). Для ускорения адаптации свежевыделенных бруцелл в среду, со­держащую питательный агар, глюкозу и глицерин, добавляют риванол (Резников Б. Ф., 1987).

Способность бруцелл дезаминировать серии выявили Бело-баб В. И. и соавт. (1969), Меринов С. П., Широков В. А. (1971). Позднее механизм деградации бруцеллами серина, треонина и некоторые свойства ферментов, участвующих в этом процессе, изучали Широков В. А., Меринов С. П. (1976).

Исходя из полученных ранее данных о питательных потреб­ностях вакцинного штамма Br. abortus 82 (Хазипов Н. 3. и соавт., 1973; Корунов В. П., 1974), атакже анализа литературы по данно­му вопросу (Передереев Н. И., Журавель Е. Ш., 1968; Вершилова П. А, 1972), Корунов В. П. (1980) подобрал компоненты полу­синтетической среды, содержащей гидролизат лактальбумина фабричного производства, 1% глюкозы и набор неорганических солей и витаминов: хлорид и фосфат натрия, гипосульфат, суль­фат магния, железо, марганец, тиамин, никотиновую кислоту, пантотенат кальция. Сравнение с классическим печеночно-пеп-тонным бульоном (ППБ) физико-химических характеристик по­казало их сопоставимость, причем количество аминного азота-одного из основных показателей качества среды—в полусинтети-

чз

PSST; HAE; BTBST; SS-VN; STA; НАЕВ; SPB; WBAYB; TBS; GSTB7.4 и GSTB8.5; а также STB.

В настоящее время в коммерческом варианте у нас в стране для культивирования и выделения вибрионов выпускаются ага­ровые среды Иркутским НИПЧИ (состоит из гидролизатов казе­ина и кормовых дрожжей, хлорида, фосфата и метабисульфита натрия, едкого натрия и агара) и НПО «Питательные среды» г. Махачкала (щелочной и МА-агары). Ассортимент сред зарубеж­ных производителей, работающих на нашем рынке, гораздо ши­ре. Это агары TCBS («Difco», «Sanofi», «Sinn»), SDS, Rippey-Gabelli («Himedia») и другие.

компонента не обеспечивали приемлемого роста пастерелл. По­казана стимуляция дыхания и роста их некоторыми аминокисло­тами, например лейцином и тирозином, гидролизатом рыбно-костной муки, пептоном, при индифферентном отношении по­пуляции к добавлению пантотената кальция и валина. Вакцинные препараты, приготовленные из выращенных культур были безвредны и иммуногенны.

Попова Т. Е. (1997) сравнивала кулыурально-морфологиче-ские свойства P. multocida при выращивании в среде 199 и буль­оне Хоттингера. Установлено влияние различных концентраций глюкозы в среде 199.

4.3. Сем. Пастереллы Род Пастереллы

Hofer M. et al. (1982), Коломнина Г. Ф. и соавт. (1988) изучали влияние различных условий культивирования на рост Pasteurella multocida.

Коротеева Л. А. (1991) готовила питательные среды для куль­тивирования вакцинных штаммов кампилобактерий и пастерелл на основе ферментативного казеиново-дрожжевого гидролизата. Позже Коротеевой Л. А. и соавт. (1996) предложена для культи­вирования пастерелл среда на основе лактопептона, биологиче­ские испытания которой показали ее перспективность.

Sandhu Т. et al. (1991) отмечают отсутствие роста на цитрат-ном агаре Симмонса и агаре МакКонки всех штаммов Р. апа-tipestiber, выделенных от уток и другой домашней птицы в США, Сингапуре, Англии и Германии.

Gatewood D. et al. (1994) изучали влияние состава культураль-ной среды на экспрессию специфичных белков внешней мемб­раны P. haemolytica, образование капсулы и лейкотоксина.

Moore M. et al. (1994) разработали селективную обогащенную среду для выделения пастерелл от птиц и окружающей среды.

Mosier D. et al. (1994) провели сравнительное исследование супернатантных антигенов пастерелл серотипа-1, выращенных на среде без сыворотки и с добавлением альбумина сыворотки плодов коров и сыворотки лошади.

Регламентная среда для культивирования возбудителя пасте-реллеза свиней и птиц готовится на основе ферментативного гидролизата мяса с добавкой пептона и минеральных компонен­тов. В связи с высокой стоимостью исходного сырья Клыков С. П. и соавт. (1996) предлагают среды приготовленные из альтерна­тивных источников. Сопоставимые результаты роста пастерелл получены на смесях панкреатических гидролизатов рыбно-кост-ной муки, крови и казеина при общем содержании аминного азота 200—250 мг%. Среды, на основе любого отдельно взятого

Род Хемофилус

Бактерии рода Haemophilus вызывают различные заболева­ния как у людей, так и у животных. Из-за требовательности гемо-филов, обнаружение и выделение патогена возможно только на высококачественных средах с удовлетворительным составом (Czukas Z., 1986), содержащих X и V факторы роста. Эти микро­организмы очень чувствительны к влиянию внешней среды, фи­зических и химических факторов. Трудности бактериологиче­ской диагностики связаны также с антагонистическим влиянием на их рост ряда бактерий. Поэтому совершенствование методики выделения гемофильных палочек проводится в направлении по­вышения чувствительности питательных сред и создания селек­тивных условий. Широкое применение нашли среды Левенталя, Филдса, сердечно-мозговая, с гемином, шоколадный агар и др. Селективные условия создаются антибиотиками бацитрацином, клаксоциллином, ванкомицином. Нестабильность одних сред, трудоемкость и высокая стоимость приготовления других побуж­дают к их усовершенствованию. В частности, для выделения ге­мофильных палочек предлагается «витаминный агар» с олеатом натрия (цит. по Фаустовой М. Е., 1980).

Н. aegypticus, как и Н. influenzae, могут вызывать острые конъюнктивиты. Характеризуются своими ростовыми потребно­стями и, в отличие от Н. influenzae, не растут на триптиказо-со-евом агаре с добавлением X и V факторов, плохо растут на яич­ной среде, шоколадном агаре и несколько лучше—на агаре Ко­лумбия. Эти различия отчасти могут быть объяснены содержанием крахмала в среде. Жирные кислоты яичной среды токсичны для Н. aegypticus и подавляют его рост, что может быть использовано для дифференциации Н. aegypticus, и Н. influenzae, а также для определения его питательных потребностей (Abdel-AzizH. etal., 1986).

Balke E. et al. (1988) показали возможность дифференциации видов и таксонов Haemophilus по реакции расщепление L-алани-

риями могла быть обнаруживаема и уровень, следовательно, оп­ределялся между 1 и 150/г.

Raccach M., Geshell D. (1995) показали ингибирование не­скольких штаммов L. monocytogenes (CA, ОН, SA и V7) в молоке истощенной средой, обезвоженной педиококками (dehydrated pediococcal spent medium—DPSM). Зоны ингибирования форми­ровались против всех тестируемых штаммов листерий.

EkJund M. et al. (1995) изучали сферу действия и источники L. monocytogenes в рыбных изделиях холодного копчения и продук­тах предприятий перерабатывающей промышленности. Популя­ции L. monocytogenes инокулированные на поверхности соленых кусков лососи изменялись очень незначительно в процессе холод­ного копчения при температуре от 22,2—30,6°С в течение 20 ч, с или без применения дыма, но когда температура обработки сни­жалась до 17,2—21,1°С, популяции уменьшались в 10—25 раз ко­гда дым применялся. Проникновение L. monocytogenes внутрь этих кусков увеличивалось в 2—6 раз при 17,2—21, ГС и в 100 раз при 22,2—30,6°С, независимо от присутствия дыма.

Показана реверсия покоящихся форм листерий в вегетатив­ное состояние под воздействием фетальной сыворотки и ауксина (Пушкарева В. И. и соавт., 1997).

Capell С. et al. (1995) предлагают метод и среду для электриче­ского определения Listeria spp. в пище. Описывают усовершенст­вование жидкой среды для детекции видов листерий мониторин­гом емкости образцов пиши, предварительно обогащенных в бульоне UVM 1. Показан быстрый рост L. monocytogenes в жид­ких средах с селективностью, основанной на антибиотиках при­сутствующих в Oxford-arape. Концентрации Оксфордских селек­тивных агентов в конечном варианте емкостной среды были вы­ше, чем в собственно Oxford-arape, и эта среда не требовала проведения реакции эскулин/цитрат железа-аммония. Среда ба­зировалась на способности листерий индуцировать изменение более чем на 30% ее емкости в течение 30 ч. При параллельном сравнении выявления листерий в тестируемых образцах крупной пищевой компании, метод дал меньшее количество ложнополо-жительных результатов, чем использование Fraser-бульона.

Выделение L. monocytogenes путем посева материала на плот­ные среды считалось невозможным, так как при этом затруднено разграничение данного микроорганизма от непатогенных листе­рий. Foret J., Dorey F. (1997) показали быструю идентификацию L. monocytogenes на селективной среде ЕНА. Основой среды яв­ляется Columbia-агар с 5% бараньей крови и с добавлением сфингомиелиназы (10 ЕД/л), способствующей образованию чет­ких зон гемолиза вокруг колоний. Добавление 0,4% 4-метилум-беллиферил-Р-О-глюкозида позволяет идентифицировать род листерий по флуоресценции колоний в ультрафиолетовом свете при 450 нм. Среда содержит 1 % хлорида лития и комплекс анти­биотиков (SR 1400 «Oxoid»). Высеваемость на предложенной

среде была значительно выше, чем на средах Oxford и Palcam. Се­лективную среду Palcam для изоляции листерий выпускают мно­гие зарубежные фирмы.

Ottaviani F. et al. (1997) испытали селективную агаровую сре­ду САС для L. monocytogenes с добавлением селективного кок­тейля и дифференцирующего реагента, состоящего из смеси ме­таллов, а также очищенных фосфолипидов. Через 24 ч на среде развиваются голубые колонии рода листерий, a L. monocytogenes окружены мутным ореолом. Применение САС рекомендовано для первичного выделения L. monocytogenes как экономичный и быстрый метод.

Дата добавления: 2015-07-08