Лабораторная работа. Качественная реакция на пептидную связь.

Качественная реакция на пептидную связь.

Количественное определение белка.

Цель работы: изучить свойства белков, обусловленные их строением.

Сущность работы: провести опыты, подтверждающие наличие пептидной связи, определить содержание белка в исследуемом растворе.

Реактивы: растворы яичного белка разной концентрации, 1%-ный раствор сульфата меди(II),10%-ный раствор щелочи.

1. Биуретовая реакция на пептидную связь:

?

В четыре пробирки помещают по 1 мл раствора яичного белка разной концентрации, затем в каждую пробирку добавляют по 1 мл раствора гидроксида натрия (c(NaOH) = 1 моль/л). В каждую пробирку (по стенке пробирки) добавляют по 2 мл раствора сульфата меди(II). Наблюдают появление красно-фиолетовой окраски.

Уравнение реакции:
Вывод:	________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

2. Количественное определение белка в растворе:

В основе метода лежит биуретовая реакция! Для построения калибровочного графика из раствора белка с точно известной массовой долей (ω = 1,00%) готовят четыре раствора методом последовательного разведения. В пять пробирок помещают по1,00 мл растворов белка: в четыре пробирки – растворы для построения калибровочного графика, в пятую пробирку – исследуемый раствор.Содержимое пробирок перемешивают стеклянными палочками и оставляют на 20 минут при комнатной температуре. Измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре ПЭ – 5300 В. Стандартный раствор готовят смешиванием 1,00 мл дистиллированной воды, 1,00 мл раствора гидроксида натрия и 0,10 мл раствора сульфата меди(II). Длина волны 24

светофильтра – 540 нм. Записывают результаты измерений.

!!! (эту часть работы делать не надо, в таблице представлены данные для построения калибровочного графика).

В чистую пробирку помещают 2 мл исследуемого раствора, добавляют по 2,00 мл раствора гидроксида натрия и 0,20 мл раствора сульфата меди(II). Содержимое пробирок перемешивают стеклянной палочкой и оставляют на 15 минут при комнатной температуре. Измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре

ПЭ – 5300 В. Длина волны светофильтра – 540 нм. Строят калибровочный график D = f(ω, %) (на миллиметровой бумаге) по готовым данным из таблицы и определяют массовую долю белка в исследуемом растворе. Делают вывод о содержание белка в исследуемом растворе.

Массовая доля белка ω, %	1,000	0,75	0,5	0,25	Испытуемый раствор
Оптическая плотность, D	1.1	0,8	0.5	0,2

Калибровочный графикD = f(ω, %):

?

Вывод: ___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Дата добавления: 2015-08-10