Читайте также:
|
Все гораздо сложнее, чем у растений. Нужно помнить, что организм высших животных сложнее любого растения. Для его существования - более сложные взаимодействия генов при реализации генет информации. Введение чужеродной генетической информации в животные гораздо менее предсказуемо. Если у растений - хорошие регенеративные свойства, то у животных целостный организм из отдельных тканей невозможно. Если получен вариант животного, несущего чужеродный ген, то размножать его можно только половым способом - потомство получается неоднородным. У растений клон поддерживается без проблем. Невозможно использовать самооплодотворение (как самоопыление у растений), приходится использовать близкородственные скрещивания. Все попытки полностью вырастить млекопитающее из зиготы вне материнского организма не увенчались успехом.
Велись работы на мышах. Одним из первых разработан вариант введения генетической информации путем трансфекции бластомеров мыши. Используется восьмиклеточный эмбрион, который обрабатывают вирусными векторами в различных вариантах. Эмбрион подращивается и имплантируется в специально подготовленное животное. Далее потомков анализируют на присутствие гена.
Еще один метод - микроинъекции. Получил наибольшее распространение. Для реализации - стимулируют овуляцию (введение сыворотки из крови беременной лошади), через 48 часов - инъекция хорионического гонадотропина человека. Одновременно созревает 30 или больше яйцеклеток. Затем проводят скрещивание с самцами и сразу после скрещивания самки умерщвляются чтобы вымыть яйцелкетки из яйцеводов. Надо сделать до слияния ядер сперматозоида и яйцеклетки. В мужской пронуклеус вводится ДНК. Все это делается при визуальном контроле на специальных микроскопах. С использованием манипуляторов. Дальше происходит слияние пронуклеусов, зигота имплантируется в матку суррогатной матери - специально подготовленная мышь (скрещивание с вазэктомированными самцами - в семенной жидкости нет сперматозоидов). Скрещивание ведет к тому, что начинается подготовка к имплантации. Разрабатывали гормональную стимуляцию, но безуспешно. В матку самки вводят около 30 зигот, в рассчете на то, что хотя бы часть имплантируется нормально. После рождения потомства анализируют каждого на присутствие ДНК. Метод трудоемок, требует специальной подготовки. Квалифицированный специалист - несколько сотен в день. Некоторые из рождающихся погибают сразу после рождения. Их анализируют, но без особого успеха.
Берут кусок хвоста, выделяют ДНК и осуществляют ПЦР. Для мышей - из 1000 имплантированных зигот от 10 до 30 трансгенных. Если такой потомок отобран, то его выращивают до половозрелости и проводят имбридинг для закрепления информации. Потомки в каждом этапе инбридинга анализируются. Ведется до получения гомозигот. Тоже есть трудности, связанные с экспрессией генов. Не понятно, почему они перестают работать. В потомстве он вообще не выражается. Тоже не эффективный выход. Чистые линии холят и лелеют.
Дата добавления: 2015-11-16; просмотров: 43 | Нарушение авторских прав
| <== предыдущая страница | | | следующая страница ==> |
| Вирус простого герпеса1. | | | Введение генетически модифицированных стволовых клеток в бластоцисты. |