Шаг 2. Разрушить (лизировать) клетки

После того, как вы собрали клетки, их необходимо лизировать (разрушить), чтобы высвободить ДНК. Мембраны клеток сделаны из жиров и белка и детергент (моющее средство) растворяет их точно так же, как растворяет жиры и белки на грязной сковородке. Процесс разрушения клеток называется лизисом, а содержащий детергент раствор – буфером для лизиса. После растворения мембран, ДНК оказывается в растворе.

Вопрос 2: какой водой лучше мыть посуду, теплой или холодной? Как вы думаете, при высоких или низких температурах детергент будет лучше разрушать мембраны?

Вопрос 3: Как вы думаете, будет ли ДНК видна после того, как вы разрушили клетки? Почему вы так думаете?

Шаг 3: Удаление белков

ДНК плотно упакована с помощью белков, она фактически намотана на них, как нитки намотаны на катушку. Благодаря этому она не запутывается и имеет сложно организованную структуру. Чтобы вы смогли увидеть ДНК, надо удалить эти белки, чтобы молекулы ДНК из разных клеток собрались в один большой комок. Для этого вы будете инкубировать ваши лизированные клетки с протеазой, ферментом, расщепляющим белки, так что они больше не способны связывать ДНК. Протеаза это фермент, который работает лучше всего при 50ºС – это температура слегка горячей воды. Помимо белков, связанных с ДНК, протеаза расщепляет любые оставшиеся клеточные или мембранные белки, которые могут помешать выделению ДНК.

Вопрос 4: как вы думаете, где протеазы находятся в вашем организме? Подсказка: где расщепляются белки, которые вы едите?

Шаги 4 и 5: осаждение ДНК

Нити ДНК такие тонкие, что увидеть их, когда они растворены в воде, невозможно. Представьте себе тонкую белую нитку. Если растянуть ее в воздухе через всю комнату, ее будет трудно увидеть. Однако, если собрать всю нитку в один комок на полу, вы легко ее обнаружите. В этой лабораторной работе вы используете соль и холодный спирт, чтобы вывести ДНК из раствора, или осадить ее. Добавление соли и спирта создает условия, когда ДНК не может больше растворяться, и она слипается вместе, образуя плотный комок.

Вопрос 5: пробовали ли вы когда-нибудь добавлять сахар в холодный чай? Легко ли он растворялся? Легче ли растворить то же количество сахара в горячем чае?

На что похож осадок ДНК?

Как соль, или сахар, ДНК бесцветна, когда растворена в жидкости, но достаточно большой осадок ДНК становится виден как тонкие белые нити, висящие в жидкости. Эти нити хрупкие, и могут легко порваться. Когда масса ДНК вынимается из жидкости, она слипается в комок, как лапша, вынутая из кастрюли.

Выделение и осаждение ДНК: лабораторный протокол

Дата добавления: 2015-08-10