Диагностика

Для идентификации урогенитальных микоплазмозов используются:

— бактериологический (культурольный) метод;

— серологические методы;

— определение антигенов микоплазм методом РИФ или ИФА;

— метод активированных частиц;

— метод генетических зондов;

— метод полимеразной цепной реакции.

• Бактериологический метод диагностики (цветная реакция) основан на расщеплении мочевины, необходимой для роста уреаплазм, изменении рН и, как следствие, изменении цвета среды, в которую добавлен индика­тор. Основой для роста ми­коплазм признана среда, в состав которой входят гидролизат (триптический перевар) сердца крупного рогатого скота, лошадиная сыворотка и дрожжевой экстракт. Для оптимизации роста в среды вносятся обога­щающие добавки, прежде всего аминокислоты L-цистеин и L-аргинин. Поскольку состав микоплазменных сред вполне подходит и для развития истинных бактерий, для подавления последних в среды добавляют пени­циллин в большой концентрации (от 1000 до 2500 ЕД/мл). Генитальные микоплазмы могут культивироваться как на жидких, так и на плотных пита­тельных средах. Посев клинического материала на жидкие питательные среды используется как предварительный тест на ферменты уреазу (для U. urealyticum) и аргиназу (для М. hominis производят одновременный посев клинического материала или субпассаж выделенной культуры с жидкой питательной среды на плотную с целью последующей идентификации вы­росших микроколоний возбудителей, которые имеют характерную для каждого вида морфологию. При прямом посеве клинического материала на плотные питательные среды производят подсчет выросших микроколо­ний для определения этиологически значимой концентрации микоплазм.

В последние годы появились специальные тест-системы, пользуясь которыми можно одноэтапно определять на жидкой питательной среде не только наличие того или иного микоплазменного возбудителя, но и его концентрацию в исследуемом клиническом материале (тест-система "Mycoplasma DUO").

При микробиологическом анализе берут пробы со слизистой уретры. Про­бы мочи для выделения микоплазм предпочтительно брать из утренней первой и срединной порции. При подозрении на простатит необходимо получить для посева секрет предстательной железы. При мужском беспло­дии неясной этиологии целесообразно микробиологически исследовать сперму. Микробиологическому обследованию подлежат также биосуб­страты при лапароскопии, амниоцентезе, а также ткани абортированных и мертворожденных плодов.

• Серологические реакции (РСК, РИМ, РПГА, ИФА) рекомендуется использовать при массовых обследованиях групп населения, а также для подтверждения клинического диагноза. Однако серологическая диагно­стика микоплазм и уреаплазм весьма затруднительна в связи с существо­ванием большого числа серотипов этих возбудителей, а также с недоста­точной изученностью иммунологических изменений при поражении мо­чеполовых путей микоплазмами. При микоплазменных инфекциях моче­половых путей воспалительный процесс захватывает значительно мень­шую анатомическую сферу, особенно у мужчин. Это сопровождается сла­бым раздражением иммунной системы и слабой выработкой антител. Об­разование антимикоплазменных антител характерно для генерализованных процессов при послеродовых микоплазменных осложнениях (после­родовая бактериемия, сепсис, осложнения после абортовВ настоящее время одним из обще­доступных диагностикумов является "МикогомоСкрин (G+M)" — выявле­ние антител классов IgM и IgG методом ИФА против М. hominis. Четырех­кратное нарастание титра антител в динамике заболевания свидетельству­ет об инфекционном процессе, обусловленном M.hominis.

• Разработаны методы выявления антигенов микоплазм и уреаплазм в сыворотке крови и других субстратах — РАГА (реакция агрегатгемагг-лютинации), ИФА, РИФ. Для постановки РИФ используют специфическую антисыворотку, конъюгированную с флюорохромом. Среди стандартных диагностикумов можно отметить тест-систему "УреаСлайд" для выявления антигенов U. urealyticum методом прямой иммунофлюоресценции и аналогичную тест-систему "МикоСлайд" для выявления антигенов M.hominis.. В исследуемых микропрепаратах микоплазмы выявляются в виде полиморфных структур (зёрен, гранул, коккобактерий и т.д.), имеющих ярко-зелёное свечение, на поверхности эпителиальных клеток, в образцах спермы — на сперматозоидах, а также свободно. Неспецифическая бактериальная микрофлора окрашивается в оранжевый свет, а клетки эпителия, лейкоциты, сперматозоиды — в оран­жевый и красно-бурый. Качество мазка определяется наличием клеток и клеточных элементов при минимальном количестве слизи, эритроцитов. Следует отметить, что выявление антигенов микоплазм с помощью РИФ практикуется лишь как качественная реакция на присутствие инфекции и не позволяет определять этиологически значимое количество возбудителя.

• Метод активированных частиц (диагностикум "Рохатест") предна­значен для выявления U. urealyticum и М. hominis в мазках. Исследуемый материал из урогенитального тракта больного наносится на предметное стекло, подсушивается и стеклографом вокруг мазка обводится поле, в которое наносится нормальная кроличья сыворотка, предварительно раз­веденная буферным раствором. Проводят инкубацию изучаемого мате­риала (10 мин при комнатной температуре или 5 мин в термостате при 37°С). Во время инкубации аккуратно покачивают предметное стекло не­сколько раз. Затем наносится диагностикум Рохатест и растворы смеши­вают, плавно покачивая предметное стекло в течение 2 мин. По окончании проведенных процедур проводят учет результатов реакции.

• Разработан новый диагностический метод, основанный на применении генных зондов. Описаны зонды трех классов:

— зонды из фрагментов рРНК;

— зонды из клонированных фрагментов ДНК, состоящие из после­довательностей, специфичных для определённых видов или даже штаммов;

— зонды, сконструированные из плазмид или вирусов микоплазм. Для выявления микоплазм разработан метод ПЦР (полимеразной цеп­ной реакции), который относится к методам ДНК-диагностики и основы­вается на распознавании последовательности нуклеотидов в генах иско­мых микроорганизмов или вирусов. ПЦР можно также использовать для характеристики штаммов при эпиде­миологических исследованиях и для определения генов антимикробной устойчивости.

Для выявления микоплазмозов урогенитального тракта наиболее под­ходящими являются бактериологический метод и ПЦР, а также тест-система "Mycoplasma DUO". Эффективными являются также серологичес­кие методы диагностики (РПГА и РАГА), особенно при НГУ и воспали­тельных процессах нижних отделов генитального тракта. Рекомендуется использовать комплекс методов исследования, так как это повышает дос­товерность обследования.

Дата добавления: 2015-07-18