|
Читайте также: |
Методом ПЦР осуществляют диагностику следующих заболеваний: ВИЧ –инфекции, гепатиты А, В, С, Д, цитомегаловирусную инфекцию, токсоплазмоз, хламидии, то есть многие вирусные и бактериальные инфекции.
ПЦР осуществляют в пробирке с помощью термостабильной ДНК-полимеразы при участии дезоксинуклезидтрифосфатов - субстратов и коротких олигонуклеотидных затравок - праймеров
Праймер - короткие, длиной в 20-30 нуклеотидов одноцепочечные фрагменты ДНК, комплементарные 3’-концевым последовательностям копируемой ДНК-матрицы
Реакция происходит в несколько стадий:
1)Денатурация.
Инкубационную смесь нагревают до 90о
При этом происходит разрушение слабых связей в ДНК и из одной двухцепочечной молекулы образуются две одноцепочечные
2)Гибридизация праймеров
Температуру снижают до 50о
При этом происходит гибридизация цепей ДНК с праймерами
3)Полимеризация
Инкубационную смесь нагревают до 70о
При этой температуре полимераза удлиняет оба праймера с их 3’-концов
Праймеры дорастают до размеров матрицы
В результате количество ДНК удваивается
Метод основан на том, что первичная структура ДНК разных видов организмов различна
Подбирается последовательности, характерные для ДНК возбудителей болезни и подобрать такие праймеры, которые будут гибридизоваться с ДНК возбудителя, но не с ДНК человека
В этом случае продуктом амплификации будет ДНК только возбудителя, а не пациента.
Для медицины имеет значение генно-инженерный способ Нужна плазмида(кольцевая днк) из поджелудочной железы животного выделают ген инсулина.Плазмиду растригают,вставляют.
1этап.Ген->образуется рекомбинантная плазмида.
2этап.внедряют в бактериальную клетку,образование нужного белка.
3этап.выделение готового синтезированного белка.
Дата добавления: 2015-08-02; просмотров: 55 | Нарушение авторских прав
| <== предыдущая страница | | | следующая страница ==> |
| Жирные кислоты.Биороль | | | Классиф ферментов.Изоферменты.Энзимодиагностика |