Студопедия
Случайная страница | ТОМ-1 | ТОМ-2 | ТОМ-3
АвтомобилиАстрономияБиологияГеографияДом и садДругие языкиДругоеИнформатика
ИсторияКультураЛитератураЛогикаМатематикаМедицинаМеталлургияМеханика
ОбразованиеОхрана трудаПедагогикаПолитикаПравоПсихологияРелигияРиторика
СоциологияСпортСтроительствоТехнологияТуризмФизикаФилософияФинансы
ХимияЧерчениеЭкологияЭкономикаЭлектроника

Иммуноферментный анализ (ИФА)

Читайте также:
  1. Fresenius (ведущий поставщик лабораторных анализов).
  2. II.Проанализировать сегодняшнее положение организации с точки зрения достижения главной цели → определение слабых и сильных сторон.
  3. Sup1; Психология и психоанализ характера. Сб. статей. Самара: Бахрах, 1998.
  4. SWOT-анализ муниципальной системы управления образованием
  5. SWOT-анализ развития всемирной выставочной индустрии
  6. VII. Анализ расходов по подсобно-вспомогательной деятельности.
  7. А) Анализ интеллекта

ИФА – это выявление антигенов (или антител) с помощью соответствующих им антител (антигенов), конъюгированных с ферментом-меткой (пероксидазой хрена, β-галактозидазой или щелочной фосфатазой).

Наиболее распространён твердофазный ИФА, когда один из компонентов иммунной реакции (антигены или антитела) сорбирован на твёрдом носителе, например, в лунках пластиковой микропланшетки из полистирола. Для определения антител в лунки с сорбированным антигеном последовательно добавляют:

- сыворотку крови больного,

- антиглобулиновую сыворотку, меченую ферментом,

- смесь растворов субстрата для фермента и хромогена.

Каждый раз после добавления очередного компонента из лунок удаляют несвязавшиеся реагенты путём тщательного промывания. При положительном результате изменяется окраска раствора хромогена в жёлто-коричневый цвет (при использовании пероксидазы) или жёлто-зелёный цвет (при использовании фосфатазы).

Если необходимо определить в исследуемом материале антиген, тогда в лунку с сорбированными антителами вносят исследуемый материал, добавляют иммунную сыворотку против антигена, меченную ферментом, и смесь растворов субстрата для фермента и хромогена.

Для постановки ИФА выпускаются специальные тест-системы с набором всех необходимых ингредиентов.

К настоящему времени созданы многочисленные модификации базовой методики ИФА.

Конкурентные методы ИФА: искомый антиген и меченный ферментом антиген конкурируют друг с другом за связывание ограниченного количества антител иммунной сыворотки. Этот тест используется для определения количества антигена в исследуемом материале.

Сэндвич-ИФА (метод двойных антител для определения антигена): фиксированные на твёрдой фазе антитела инкубируют с анализируемым антигеном. После отмывания добавляют избыток меченых антител, специфичных к тому же антигену. Несвязавшиеся антитела отмывают. Продукт ферментативной реакции образуется в количествах, пропорциональных количеству связанного антигена. Можно использовать немеченые вторые антитела; о реакции в данном случае судят по связыванию энзим-меченых антител, специфичных по отношению к IgG (вторые антитела). В любом случае первые и вторые антитела должны принадлежать животным разных видов.

Измерение количества продуктов реакции ИФА проводят в автоматизированном варианте в приборах-ридерах с помощью спектрофотометра, по оптической плотности растворов в лунках при определённой длине волны.

 


Дата добавления: 2015-09-03; просмотров: 68 | Нарушение авторских прав


Читайте в этой же книге: Метод серийных разведений | Применение бактериофагов | Самостоятельная работа студента на практическом занятии | Идентификация нуклеиновых кислот | Техника ПЦР | Задания для выполнения в процессе самоподготовки | После изучения темы студент должен уметь | Методы изучения факторов вирулентности бактерий и силы токсинов | Задания для выполнения в процессе самоподготовки | Количественная проба на лизоцим в сыворотке крови |
<== предыдущая страница | следующая страница ==>
После изучения темы студент должен уметь| Радиоиммунный анализ (РИА)

mybiblioteka.su - 2015-2024 год. (0.005 сек.)