ТП.3 Выращевание вегетативного посевного материала в посевном аппарате

Вегетативный посевной материал выращивают в посевных аппаратах (поз.23), объемом 1 м³.

ТП. 3.1 Подготовка посевного аппарата к загрузке

С разрешения мастера открывают люк, тщательно промывают внутреннюю поверхность аппарата питьевой водой из шланга, затем набирают воду до покрытия барботёра и, пропуская воздух, проверяют его работу. При равномерном выходе воздуха из барботёра последний считают чистым. В случае если воздух проходит через барботёр неравномерно, проводят чистку отверстий. Пропускают через бартёр пар. Промывные воды сливают в промышленную канализацию.

Если предыдущая операция была нестерильна, перед сливом содержимого проводят проверку аппарата на герметичность при давлении воздуха 0,12-0,15 МПа. Массу нагревают до 100-110⁰С, подачей острого пара через все коммуникации и выдерживают 30 минут.

Содержимое аппарата, после предварительной убивки, вывозят в специально отведенное место.

В аппарат подлежащий мойки заливают небольшое количество воды, загружают едкий натр, до концентрации 3-5%. Доливают воду до люка, аппарат герметично закрывают, нагревают острым паром до 90-100⁰С при работающей мешалке и открытой воздушке. Делают выдержку при этой температуре в течении часа, затем содержимое аппарата охлаждают до температуры 35-45⁰С и передают в другой аппарат (допускается трехкратное использование моющего раствора). После промывают аппарат водой и приступают к его ремонту. Во время ремонта производят внутренний осмотр аппарата, проверяют крепление трубы барботёра, лопастей и муфт мешалки, заменяют прокладки вентилей входа и выхода, пробоотборника, прокладку люка, проверяют уплотнение вала мешалки.

Выявленные дефекты устраняют, закрывают люк, и аппарат проверяют на герметичность при давлении воздуха 0,12-0,15 МПа с помощью мыльного раствора. Проверяют герметичность фланцевых соединений, сварных швов, уплотнений сальников и вала мешалки, посевного штуцера, места уплотнений по резьбе манометра, прокладок крышки аппарата и люка. Давление в аппарате не должно падать в течении 30 минут. Если герметичность не достигнута, выявленные дефекты устраняют, и аппарат снова проверяют на герметичность.

Отремонтированный герметичный аппарат стерилизуют острым паром в течение 1-1,5 часов при температуре 130-135⁰С и давлении 0,19-0,22 МПа. Подачу пара ведут через все подводящие трубопроводы: барботёр, пробоотборник и посевную линию. При достижении температуры 125⁰С, начинают стерилизацию посевного штуцера, открыв его на 2-3 оборота, стерилизуют в течении 30 минут. После стерилизации посевной штуцер закрывают. При достижении температуры 130-135⁰С и давления 0,19-0,22 МПа отмечают начало стерилизации и стерилизуют 1-1,5 часа. Первые 30 минут стерилизуют при открытой воздушке, затем вентиль закрывают. По окончании стерилизации прекращают подачу пара и начинают охлаждать подачей воды в рубашку. При давлении в аппарате 0,06-0,08 МПа паровое давление меняют на воздушное и приступают к приготовлению питательной среды.

ТП.3.2 Приготовление и стерилизация питательной среды

Питательную среду для посевных аппаратов готовят также как и для инокуляторов.

Питательную среду для посевного аппарата готовят в смесителе (поз.14).

Смеситель для приготовления питательной среды представляет собой аппарат с плоским днищем и крышкой. Работает под атмосферным давлением, оснащен рамной мешалкой (чтобы происходило меньше вспенивания), гладкой приварной рубашкой, загрузка через люк.

В аппарат через люк при работающей мешалке загружают питьевую воду, добавляют навеску кукурузной муки, предварительно взвесив на весах (поз.1), нагревают глухим паром до температуры 70-88⁰С. И при этой температуре разваривают муку в течение 30 минут при включенной мешалке.

Затем добавляют навески мела, соли предварительно разведённые водой и тщательно перемешанные. В смеситель также поступает кукурузный экстракт из сборника (поз.4) при помощи насоса (поз.8). Доводят рН до 6,8-7,2 40% раствором щелочи, который насосом (поз.15) передают из сборника (поз.11). Затем через люк загружают пеногаситель адеканоль.

При непрерывно работающей мешалке приготовленную питательную среду по трубопроводу, предварительно отработанному паром, центробежным насосом (поз.18) передают в посевной аппарат (поз.23).Перед насосом (поз.18) стоит мембранный фильтр (поз.17), состоящий из нержавеющей металлической сетки. Он служит для механического удаления комочков в питательной среде. Комочки необходимо удалять для того, чтобы стерилизация среды была эффективная, так как в центре комочка могут не погибнуть микроорганизмы и вероятен риск контаминации.

После передачи питательной среды в посевной аппарат при закрытой воздушке открывают вентиль подачи воздуха на барботёр. При достижении воздушного давления 0,12-0,15 МПа вентиль подачи воздуха на барботёр перекрывают.

При наборе давления, во избежание попадания среды из инокулятора в индивидуальный фильтр, строго соблюдается положение: давление на индивидуальном фильтре на 0,02-0,04 МПа выше, чем на аппарате.

При давлении на паровой магистрали 0,25-0,3 МПа, при работающей мешалке, после предварительного спуска воды и конденсата из рубашки, подают острый пар в аппарат: через посевную линии, барботёр и пробоотборник.

При температуре 105⁰С прикрывают воздушку, оставляя ее открытой на 0,5-1 оборот, при температуре 115-117⁰С начинают стерилизацию посевного штуцера, открыв его на 1,5-2 оборота и стерилизуют его в течении 30 минут. При достижении температуры 127-129⁰С и давлении 0,15-0,17 МПа отмечают начало стерилизации и стерилизуют аппарат со средой в течении одного часа при постоянно работающей мешалке. По окончании стерилизации среды прекращают подачу острого пара и начинают охлаждение путём подачи захоложенной воды в рубашку аппарата.

При снижении давления пара до 0,06-0,08 МПа меняют паровое давление на воздушное. Охлаждение среды ведут до температуры 26-28⁰С, при этом давление в аппарате поддерживают стерильным сжатым воздухом в пределах 0,05-0,06 МПа.

Перед посевом после 30 минутной пропарки пробника, в зоне огня (соблюдая асептику), отбирают пробу среды для определения биохимического состава рН и стерильности. После отбора проб пробник оставляют на пропарке.

Питательная среда должна иметь следующий биохимический состав:

-углеводы 1-1,7%

-рН 6,8-7,2

Результаты анализа записываются в микробиологическом журнале.

ТП.3.3 Засев питательной среды и выращивание вегетативного посевного материала

Простерилизованную и охлаждённую до 26-28⁰С среду, после отбора первой пробы на стерильность и биохимический состав, засевают посевным материалом из инокулятора (поз.21).

Посев по посевной линии, простерилизованой острым паром, занимает один час. После посева отбирается проба на определение отсутствия посторонней микрофлоры и рН среды, результаты записываются в журнал.

По окончании передачи посевного материала закрывают вентили на посевной линии, сначала у посевного аппарата, а затем у инокулятора. Посевную линию пропаривают острым паром в течение 15-20 минут. После посева устанавливают воздушное давление в аппарате 0,03-0,05 МПа. Температуру выращивания поддерживают 26-28⁰С. Количество подаваемого воздуха 30-48 м³/час. Мешалка работает непрерывно.

Температура подаваемого воздуха 50-55⁰С, продолжительность выращивания 36-48 часов.

При сильном вспенивании добавляют из колб стерильный пеногаситель- адеканоль. Указанные параметры ежечасно аппаратчик записывает в журнал.

Через каждые 6 часов из аппарата, в асептичных условиях, отбирают пробы для контроля развития лучистого гриба, отсутствие постороннй микрофлоры, рН, результаты записывают в журнал микробиолога.

Посевной материал для передачи в ферментатор должен соответствовать:

-рН 6,8-7,0

-внешний вид – густая хлопьевидная масса, заполняющая не менее 1/3 объёма пробы

-при микроскопировании окрашенного препарата, мицелий должен иметь вид густого скопления звёздчатых микроколоний с хорошо развитыми ветвящимися гифами членистого строения.

К моменту передачи посевного материала, в высевах из исходного мицелия, питательной среды и всех проб из посевного аппарата должна отсутствовать посторонняя микрофлора, а также должна отсутствовать посторонняя микрофлора при микроскопировании пробы перед подачей посевного материала в ферментатор.

Если посевной материал не соответствует требованиям, то он в производстве не используется, а содержимое аппарата нагревается до 123-125⁰С, выдерживается один час и сливается в промышленную канализацию.

Дата добавления: 2015-08-03