Исследование минерализата.

Получение минерализата.

1. Подготовка объекта (матка) 100 г. Матку измельчили ножом до размера кусочков 1 см.

2. Деструкция. Подготовленный объект исследования поместили в колбу Кьельдаля емкостью 500-800 мл и залили смесью равных объемов дистиллированной воды, концентрированными серной и азотной кислот (75 мл смеси вводили для обработки 100 г матки). Колбу закрепляли в штативе в вертикальном положении так, чтобы дно ее не находилось на расстоянии 1-2 см от асбестовой сетки. Под колбой укрепляли делительную воронку с азотной кислотой (1:1). После подготовки прибора, начинали осторожно нагревать колбу. При необходимости (потемнение жидкости) добавляли азотную кислоту, разбавленную по каплям до просветления жидкости.

3. Глубокое жидкофазное окисление. Нагревание колбы умеренно усилили. Нагревание проводили на плитке. Минерализация была закончена, когда после прекращения подачи азотной кислоты из капельной воронки из колбы с маткой выделялись белые пары, и образовался бесцветный минерализат.

4. Денитрация. В емкость с минерализатом добавляли восстановители: мочевину, формалин. При этом отмечалось обильное выделение бурых (иногда оранжевых) паров. После окончания выделения паров еще нагревали в течении 5-10 минут. Образовалась бесцветная прозрачная жидкость. Затем 1-2 капли охлажденной жидкости (минерализата) наносили на предметное стекло или фарфоровую пластинку и прибавляли капли раствора дифениламина в серной кислоте. Денитрация бала прекращена при отрицательной реакции с дифениламином.

Исследование минерализата.

1. В пробирку к 1 мл минерализата вносили 4 мл воды, 1 мл насыщенного раствора дигидрофосфата натрия, 0,1 г перйодата калия. Нагревали на кипящей водяной бане в течении 20 мин. Розовое окрашивание не появилось.

2. В пробирку вносили 1 мл минерализата, 4 мл воды, 1 мл насыщенного раствора дигидрофосфата натрия. Смесь нагревали на кипящей водяной бане в течении 5-6 мин. К горячему раствору добавили 1 каплю 10%-го раствора нитрата серебра и 0,5 г персульфата аммония. Смесь снова нагревали в течении нескольких минут. Розовое окрашивание не появилось. Полученный раствор разделили на две части.

Затем к одной части бесцветной жидкости прибавляли 1 мл насыщенного раствора фосфата натрия, рН=1,7, и добавляли 1 мл 0,25% раствора дифенилкарбазида. Окрашивания не появилось.

Ко второй части добавляли уксусно-этиловый эфир, толщина слоя которого 0,5 см и 2 капли 25% раствора пероксида водорода. Содержимое пробирки энергично взбалтывали. Окрашивание органического растворителя не появлялось.

3. В пробирку вносили 5 мл минерализата, 1 мл 8 н. раствора серной кислоты и 3 мл 0,01%-го раствора дитизона в хлороформе. После встряхивания содержимого пробирки хлороформный слой не приобрел золотисто-желтую окраску.

4. В пробирку к 1 мл минерализата небольшими порциями прибавляли 25% раствора гидроксида аммония до рН=3,0, 1 мл хлороформного раствора диэтилдитиокарбамата свинца, взбалтывали. Появлялось желто-коричневое окрашивание органического растворителя.

В делительную воронку к 10 мл минерализата небольшими порциями прибавляют 25% раствор гидроксида аммония до рН=3,0, 5 мл хлороформного раствора диэтилдитиокарбамата свинца и взбалтывают. Окрашенный хлоро­формный слой отделяют и переносят в другую делительную воронку, прибав­ляют к нему 6 н. раствор соляной кислоты (для разрушения избытка диэтилди­тиокарбамата свинца), взбалтывают и отделяют водную фазу. К хлороформной фазе по каплям прибавляют 1% раствор хлорида ртути (II) и содержимое дели­тельной воронки взбалтывают до тех пор, пока не наступит полное обесцвечи­вание хлороформного слоя. Водную фазу отделяют.

4.1. В пробирку к 0,5 мл реэкстракта прибавляют 0,2 г сульфата цинка и не­сколько капель раствора тетрародано-(II)-меркурата аммония. Выпадает осадок розово-лилового цвета.

4.2. В пробирку к 0,5 мл реэкстракта прибавляют 10 капель 2% раствора хло­рида кадмия и 2 капли 5%-го раствора гексацианоферрата (II) калия. Выпадает лиловый осадок.

5. В пробирку к 0,5 мл минерализата прибавляли 10% раствор натрия гидроксида и ацетатный буферный раствор до рН=5,0. Жидкость хорошо перемешивали и прибавляли 1 мл хлороформа, 2 капли 0,01% раствора дитизона в хлороформе и взбалтывали. Окрашивание органического растворителя не появлялось. Затем довели 10% раствором натрия гидроксида и ацетатным буферным раствором рН до 6,0, но хлороформный слой не окрасился.

6. В пробирку вносят 0,5 мл минерализата и прибавляют 2 мл ацетатного буферного раствора (рН=6), 1 мл хлороформа, 2 капли 0,01% раствора дитизона в хлороформе, а затем содержимое хорошо взбалтывают. Хлороформный слой не окрашивается.

7.1 В пробирку вносили 5 мл минерализата, прибавляли 30% раствор натрия гидроксида до рН=5,0, затем 0,1 г йодида калия и оставляли на 2 мин. По стенкам пробирки осторожно прибавляли 1-2 мл 2% раствора 8-оксихинолина а 2н. растворе соляной кислоты. Изменения окраски не произошло.

7.2 В пробирку вносили 5 мл минерализата и прибавляли 3-5 мл насыщенного раствора тиомочевины. Изменения окраски не произошло.

8.1 В делительную воронку вносят 5 мл минерализата, 3 мл 5 н. раствора со­ляной кислоты и 2 капли 5% раствора нитрита натрия. Смесь взбалтывают, че­рез 5 мин добавляют 1 мл насыщенного раствора мочевины, 7 капель 0,5% рас­твора красителя в смеси воды и этилового спирта (3:1) и 5 мл толуола. Содер­жимое делительной воронки взбалтывают. Толуольный слой не приобретает окраску.

8.2. В пробирку вносят 5 мл минерализата, прибавляют 5 капель насыщенного раствора тиосульфата натрия и смесь кипятят в течение 1-2 мин. Осадок не образуется.

Дата добавления: 2015-07-15