|
Читайте также: |
Как указывалось выше (см. стр. 2 – 3), для двусубстратной реакции возможно из экспериментальных данных определить одну из констант скоростей (
) и выражения, содержащие набор элементарных констант скоростей, более простых, чем эффективные константы Михаэлиса и максимальные скорости пероксидазной реакции. Для этого необходимо определить эффективные константы Михаэлиса по пероксиду водорода при разных начальных концентрациях второго субстрата – KI. Для определения константы скорости строят зависимость обратной величины эффективной максимальной скорости от обратной величины концентрации йодида. Отрезок, отсекаемый прямой на оси ординат, равен 
. Концентрацию пероксидазы определяют спектрофотометрически при 400 нм (полоса Соре). Коэффициент молярного поглощения гем-группы ε = 9.5∙104 М–1×см–1.
Порядок выполнения задачи.
1. Определите эффективную максимальную скорость реакций и эффективную константу Михаэлиса по H2O2, как описано в работе 2 для 3 – 4 концентраций KI.
В таблице 7 приведены составы реакционных смесей, рекомендуемые при выполнении данной работы.
Таблица 7.
Опыт 1. [KI]исх = 6×10–3 М, [KI]оп = 3×10–3 М
| № | KI, мл | Ацетатный буфер, мл | Пероксидаза, мл | H2O2 (4×10–3 М), мл |
| 2.0 | 1.85 | 0.1 | 0.05 | |
| 2.0 | 1.8 | 0.1 | 0.1 | |
| 2.0 | 1.7 | 0.1 | 0.2 | |
| 2.0 | 1.4 | 0.1 | 0.5 | |
| 2.0 | 0.9 | 0.1 | 1.0 |
Опыт 2 [KI]исх = 6×10–3 М, [KI]оп = 3.75×10–3 М
| 2.5 | 0.1 | 0.05 | ||
| 2.5 | 0.1 | 0.1 | ||
| 2.5 | 0.1 | 0.2 | ||
| 2.5 | 0.1 | 0.5 | ||
| 2.5 | 0.1 | 1.0 |
Опыт 3. [KI]исх = 6×10–2 М, [KI]оп = 7.5×10–3 М
| 0.5 | 0.1 | 0.05 | ||
| 0.5 | 0.1 | 0.1 | ||
| 0.5 | 0.1 | 0.2 | ||
| 0.5 | 0.1 | 0.5 | ||
| 0.5 | 0.1 | 1.0 |
Опыт 4. [KI]исх = 6×10–2 М, [KI]оп = 3.0×10–2 М
| 2.0 | 0.1 | 0.05 | ||
| 2.0 | 0.1 | 0.1 | ||
| 2.0 | 0.1 | 0.2 | ||
| 2.0 | 0.1 | 0.5 | ||
| 2.0 | 0.1 | 1.0 |
Здесь [KI]исх – концентрация используемого для приготовления реакционных смесей раствора; [KI]оп - концентрация йодистого калия в реакционной смеси.
2. Рассчитайте величины K M иV, одним из возможных способов (см. стр!!.)
3. Постройте зависимость 1/V от 1/[KI]0 и определите величину 
. Концентрацию пероксидазы уточните у преподавателя.
4. Покажите преподавателю полученные значения эффективных констант Михаэлиса и значение константы скорости реакции .
Дата добавления: 2015-07-10; просмотров: 81 | Нарушение авторских прав
| <== предыдущая страница | | | следующая страница ==> |
| Работа 2. Определение эффективных значений константы Михаэлиса и максимальной скорости реакции по пероксиду водорода | | | Основные положения |