Низкотемпературная спектрофотометрия

Низкотемпературная спектрофотометрия – метод спектрофотометрического анализа, основанный на регистрации поглощения света предварительно сильно охлажденными образцами. Обычно для охлаждения образца применяется жидкий азот (его температура -196^о С или 77^о К). При такой температуре межмолекулярные взаимодействия в объекте ослабляются, тепловая энергия электронов снижается, соответственно, снижается и их способность к заселению тепловых колебательных подуровней в молекулах-хромофорах. В результате разрешение полос на спектрах поглощения существенно увеличивается, вплоть до появления так называемых квазилинейчатых спектров (рис. 7).

Рисунок 7. Спектры поглощения тимина в плёнке при комнатной температуре (1) и при температуре 77^оК (2). Обратите внимание на структурализацию полосы поглощения хромофора, придающую ей квазилинейчатый вид. Отдельные линии соответствуют переходам электрона между разными колебательными подуровнями основной и возбужденной электронных орбиталей.

Публикуется с модификациями по: Рощупкин Д.И., Потапенко А.Я., Клебанов Г.И. Практикум по биофизике. Часть 1. Лабораторные работы по спектральным методам исследования и фотобиологии. М.: 1975, с. 21.

К сожалению, метод низкотемпературной спектрофотометрии не лишен недостатков.

Первый из них состоит в технической сложности поддержания низкой температуры образца во время измерения его спектра поглощения (в частности, требуется установка специальных приспособлений, предупреждающих запотевание оптических частей прибора). Усложнение же спектрофотометра неизбежно приводит к увеличению его стоимости.

Второй недостаток данного метода увеличения разрешения спектров поглощения связан с тем, что при глубоком замораживании биологического объекта может быть нарушена его структура. В результате утрачивается значимое преимущество применения спектрофотометрического анализа в биологии - неинвазивность исследования.

Дата добавления: 2015-07-25