Задача 6. Описать особенности культивирования риккетсий и хламидий.

Для этого надо знать:

1. Риккетсии и хламидии – бактерии – облигатные внутриклеточные паразиты. В отличие от вирусов размножаются простым делением, содержат оба типа НК (ДНК и РНК) и многие ферменты, необходимые для энергетического и пластического метаболизма. Риккетсии по типу дыхания – аэробные микроорганизмы, активно окисляют глутаминовую кислоту и не расщепляют глюкозу, имеют высокопроницаемую оболочку, что позволяет им получать из клетки-хозяина необходимые ферменты и метаболиты. Хламидии – энергетические паразиты клетки-хозяина, у них отсутствуют энергодающие ферментные системы.

2. Искусственные питательные среды даже самого сложного состава не могут удовлетворить потребности риккетсий и хламидий. Для их размножения необходимы живые метаболизирующие клетки, в отличие от вирусов, эти клетки должны обладать пониженной метаболической активностью.

3. Для выделения и культивирования риккетсий и хламидий применяются: а) тканевые культуры (описаны выше); б) куриные эмбрионы; в) восприимчивые лабораторные животные.

4. Культивирование риккетсий проводят на переживающих тканях в жидкой среде Мейтлендов (раствор Тироде и сыворотка) при 37° С 10-14 дней или на Тироде-сывороточном агаре с добавлением на поверхность измельченной эпителиальной ткани при 37° С 6-10 дней.

В тканевых культурах, пораженных риккетсиями, на 3-8-ой день отмечается большое количество коккобациллярных форм, заполняющих целиком цитоплазму или ядро клеток, которые затем гибнут. Хламидии обнаруживают в препаратах клеток, окрашенных по Романовскому-Гимзе, в которых наблюдают различные формы размножающихся организмов.

5. Для выделения риккетсий и хламидий широко используется их культивирование в 8-12-дневном курином эмбрионе; материал вводят в полость желточного мешка или на хорион-аллантоисную оболочку. Зараженные яйца помещают в термостат при 37° С на 6-7 дней. Этот метод используется для массового накопления риккетсий при изготовлении риккетсиозных препаратов (вакцин, диагностических антигенов).

6. Для получения большого количества риккетсий их культивируют в организме чувствительных лабораторных животных – заражают интраназально белых мышей, в легких которых накапливается необходимое количество риккетсий.

7. Риккетсии выращивают по методу Вейгля и Мосинга: платяных вшей заражают взвесью риккетсий путем введения в кишку через анальное отверстие с помощью специальных капилляров. Пшеничнов и Райхер разработали метод культивирования риккетсий на личинках вшей, которых кормят дефибринированной кровью с риккетсиями через мембрану кожи трупа.

Вопросы и упражнения для самоподготовки.

1. Где происходит размножение вирусов? Чем это объясняется?

2. Для чего применяют культивирование вирусов?

3. Почему вирусы не могут расти на искусственных питательных средах?

4. Назовите три основных способа культивирования вирусов.

5. Каким образом производят культивирование вирусов на животных?

6. Какие животные используются для культивирования вирусов?

7. Отчего зависит выбор метода заражения животных вирусами?

8. Как проводится индикация вирусов при их культивировании в организме животных?

9. Для чего используют, в основном, культивирование вирусов в организме животных?

10. Чем ограничивается метод культивирования вирусов в организме животных?

11. Почему куриный эмбрион очень удобен для культивирования вирусов?

12. Какими способами производят заражение куриных эмбрионов вирусами?

13. Каким образом соблюдаются асептические условия при заражении куриных эмбрионов?

14. Опишите заражение куриного эмбриона в аллантоисную полость.

15. Опишите заражение куриного эмбриона на хорион-аллантоисную оболочку.

16. Опишите заражение куриного эмбриона в желточный мешок.

17. Опишите заражение куриного эмбриона в амниотическую полость.

18. Как проводится индикация вирусов при их культивировании в курином эмбрионе?

19. При помощи какой реакции можно установить присутствие вируса в аллантоисной жидкости куриного эмбриона?

20. Как проводится реакция гемагглютинации?

21. Для чего используется РГА?

22. Опишите положительный и отрицательный результат РГА.

23. Как производится вскрытие куриного эмбриона?

24. В чем недостатки метода культивирования вирусов в куриных эмбрионах?

25. Что такое тканевая культура?

26. Какие ткани используются для приготовления тканевых культур?

27. В каких тканевых культурах проводится культивирование вирусов?

28. В чем заключается преимущество использования тканевых культур для культивирования вирусов?

29. Назовите три типа растущих тканевых культур.

30. Что такое однослойная тканевая культура?

31. Что такое культура суспензированных клеток?

32. Что такое органные культуры?

33. Какие тканевые культуры используются наиболее часто для культивирования вирусов?

34. Каким образом подразделяются однослойные тканевые культуры?

35. Что такое первичные культуры тканей?

36. Из каких тканей готовят первичные культуры тканей?

37. В чем заключаются преимущества и недостатки первичных тканевых культур?

38. Что такое перевиваемые культуры тканей? В чем преимущество перевиваемых тканевых культур?

39. В чем заключаются недостатки перевиваемых тканевых культур?

40. Назовите основные штаммы клеток для приготовления перевиваемых тканевых культур.

41. Из каких тканей готовят перевиваемые культуры?

42. Что такое полуперевиваемые тканевые культуры?

43. В чем преимущество полуперевиваемых тканевых культур?

44. Почему работу с тканевыми культурами необходимо проводить в строго асептических условиях?

45. Какие используются питательные среды для выращивания тканевых культур?

46. Как проводится выращивание тканевых культур?

47. По каким признакам судят о репродукции вирусов в тканевых культурах?

48. Что такое ЦПД?

49. Для чего используют ЦПД?

50. Почему ЦПД можно использовать для идентификации вирусов?

51. Почему наблюдается ЦПД при выращивании вирусов в тканевых культурах?

52. Для чего используется выявление вирусных включений в клетках культуры тканей?

53. Каким образом выявляют вирусные включения в клетках культуры?

54. Почему гемадсорбция является признаком присутствия вирусов в тканевой культуре?

55. Как проводится реакция гемадсорбции?

56. Что наблюдается при положительной реакции гемадсорбции?

57. Опишите использование цветной реакции для индикации вирусов в тканевых культурах.

58. О чем свидетельствует изменение цвета среды с культурой клеток?

59. Изменяется ли цвет среды при заражении культуры клеток вирусами и почему?

60. О чем свидетельствует сохранение первоначального цвета среды с культурой клеток?

61. Какие вирусы можно обнаружить в культуральной жидкости по РГА?

62. Что используется для проведения реакции гемагглютинации?

63. Что такое титр вируса?

64. Какие методы используются для определения титра вируса?

65. Опишите титрование вируса по ЦПД.

66. Опишите титрование вируса методом "бляшек".

67. В каких единицах выражают титр вируса?

68. Почему для роста и размножения риккетсий и хламидий необходимы живые метаболизирующие клетки?

69. Какие методы применяются для культивирования риккетсий и хламидий?

70. Для чего используется культивирование риккетсий и хламидий?

71. Какие тканевые культуры используются для культивирования риккетсий?

72. Как проводится культивирование риккетсий в куриных эмбрионах?

73. Как проводится культивирование риккетсий в организме животных?

74. Как проводится культивирование риккетсий по методу Вейгля и Мосинга?

75. Как проводится культивирование риккетсий по методу Пшеничнова и Райхера?

Основная литература:

1. Воробьев А.А. и др. Микробиология. – М.: Медицина, 1994. – С.37-57.

2. Кочемасова З.Н. и др. Микробиология. – М.: Медицина, 1984. – С. 43-56, С. 77-94.

3. Елинов Н.П. и др. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии. – М.: Медицина, 1988. – С. 36-58.

4. Синюшина М.Н., Самсонова М.Н. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии. –М.: Медицина, 1981. – С. 28-42, С. 168-172.

Дополнительная литература:

1. Тимаков В.Д. и др. Микробиология. – М.: Медицина, 1983. – С. 47-94.

2. Пяткин К.Д., Кривошеина Ю.С. Микробиология. – М.: Медицина, 1980. – С. 42-78.

3. Борисов Л.Б. и др. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии. – М.: Медицина, 1984. – С. 42-68.

4. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: Учебник/Л.Б. Борисов, А.М. Смирнова, И.С. Фрейдлин и др.; Под ред. Л.Б. Борисова, А.М Смирновой. – М.: Медицина, 1994. – С. 44-80.

Елена Григорьевна Доркина

Физиология микроорганизмов.

Учебно-методическое пособие для самоподготовки студентов.

Подписано к печати "___"_____________1998 г. Формат 60´84 1/16

Бумага писчая белая. Усл.-печатн. л. 2,0 Уч.-изд. л. 2,0

Тираж _________ экз. Заказ №

Пятигорская гос.фармакадемия,

357532 г. Пятигорск, пр. Калинина, 11.

Ротапринт ПГФА г. Пятигорск, пр. Калинина, 11

Контрольные вопросы

1. Какой химический состав имеют бактерии? В чем его особенности?

2. Какую роль выполняют основные химические соединения бактериальной клетки?

3. На какие основные группы делятся бактерии по типу питания?

4. Охарактеризуйте фотоавтотрофный тип питания.

5. Охарактеризуйте хемоавтотрофный тип питания.

6. Охарактеризуйте хемо"органо"гетеротрофный тип питания.

7. Какие бактерии называются прото- и ауксотрофными? Какие вещества необходимо добавлять в питательные среды при выращивании ауксотрофных бактерий?

8. Охарактеризуйте механизмы транспорта питательных веществ в бактериальную клетку.

9. Перечислите основные требования к питательным средам.

10. Для чего используются основные питательные среды? Приведите примеры жидких и плотных основных сред.

11. Для чего используются специальные питательные среды? Приведите примеры жидких и плотных специальных питательных сред.

12. Для чего используются элективные питательные среды? Приведите примеры жидких и плотных элективных сред.

13. Для чего используются дифференциально-диагностические питательные среды. Приведите примеры этих сред.

14. Объясните состав и механизм работы среды Эндо. Для чего используется эта среда?

15. Что такое чистая культура? Объясните принцип механических способов выделения чистых культур.

16. Объясните суть трех этапов выделения чистой культуры аэробных бактерий.

17. По совокупности каких признаков проводится идентификация чистых культур?

18. Опишите работу первого дня по выделению чистой культуры аэробов.

19. Опишите работу второго дня по выделению чистой культуры аэробов.

20. Опишите работу третьего дня по выделению чистой культуры аэробов.

21. Назовите способы размножения бактерий и опишите механизм бинарного деления.

22. Назовите фазы роста периодической культуры бактерий на жидкой питательной среде.

23. Что такое колония? По каким признакам и для чего провидится описание колоний?

24. В чем суть и значение процесса дыхания у бактерий?

25. Какие существуют типы дыхания у бактерий? Что такое аэробные тип дыхания?

26. Какие существуют типы дыхания у бактерий? Что такое анаэробные тип дыхания?

27. Что такое брожение? В каких условиях оно протекает? Перечислите виды брожения.

28. Какие бактерии называются облигатными анаэробами? Приведите примеры. Почему кислород токсичен для этих бактерий?

29. Какие бактерии называются факультативными анаэробами? Приведите примеры.

30. Какие методы используют для создания анаэробиоза? Опишите метод Виньяля-Вейона.

31. Опишите среду Китта-Тароцци. Для чего она используется?

32. Что такое анаэростат? Для чего он используется?

33. Опишите химические методы создания бескислородных условий.

34. Опишите метод Фортнера. Для чего он используется?

35. Что такое ферменты? Какими свойствами они обладают?

36. Приведите классификацию ферментов по типу катализируемой реакции.

37. Какие ферменты называются эндо- и экзоферментами? Какое значение для бактерий имеют экзоферменты?

38. Какие ферменты называются конститутивными и индуцибельными?

39. Почему ферментативные свойства используют для идентификации бактерий? Какие ферменты чаще всего для этого определяют?

40. Что такое сахаролитические свойства бактерий? Для чего и каким образом их исследуют?

41. Что такое протеолитические свойства бактерий? Для чего и каким образом их исследуют?

42. Какие окислительно-восстановительные ферменты, и каким образом выявляют у бактерий?

43. Опишите состав и механизм работы жидких сред Гисса.

44. Опишите состав полужидких сред Гисса? Для идентификации каких бактерий чаще всего используют среды Гисса?

45. Что такое "пестрый" ряд?

46. Как изучаются протеолитические свойства бактерий по способности разжижать желатин?

47. Определение каких конечных продуктов используется для оценки протеолитических свойств бактерий? Как их выявляют?

48. Объясните суть трех этапов работы по выделению чистой культуры анаэробов.

49. Опишите посев по методу Цейсслера.

50. Опишите посев по методу Вейнберга.

51. Какие еще среды (кроме сред Гисса) используются для изучения способности бактерий расщеплять различные углеводы?

52. Почему вирусы не культивируют на искусственных питательных средах? Перечислите основные методы их культивирования.

53. Назовите преимущества и недостатки культивирования вирусов в организме лабораторных животных.

54. Назовите преимущества и недостатки культивирования вирусов в курином эмбрионе.

55. Какие используются способы заражения куриных эмбрионов вируссодержащим материалом?

56. Как проводят культивирование вирусов в курином эмбрионе?

57. Как проводят индикацию вирусов в курином эмбрионе?

58. В чем преимущества и недостатки метода тканевых культур? Какие тканевые культуры используются для культивирования вирусов?

59. Опишите первичные однослойные культуры тканей.

60. Опишите перевиваемые однослойные культуры тканей.

61. Опишите полуперевиваемые однослойные культуры тканей.

62. Какими способами проводят индикацию вирусов в тканевых культурах?

63. Что такое ЦПД и для чего его используют?

64. Объясните использование явления гемадсорбции для индикации вирусов в тканевых культурах.

65. Как используется реакция агглютинации для обнаружения вирусов?

66. Опишите использование цветной реакции для индикации вирусов и обнаружения вирусных включений в тканевых культурах.

67. Какие методы используются для культивирования риккетсий и хламидий и почему?

68. Какие среды используют для культивирования риккетсий? Как проводят их культивирование в организме лабораторных животных и переносчиков?

Дата добавления: 2015-07-25