Задача 4. Охарактеризовать методы изучения сахаролитических свойств бактериальных культур.

Для этого надо знать:

1. Сахаролитические свойства – это способность микроорганизмов ферментировать определенные углеводы с образованием органических кислот (молочной, уксусной, муравьиной) и газа (СО₂ и Н₂). Для многих микроорганизмов они служат таксономическим признаком.

2. Для определения сахаролитических свойств используются дифференциально-диагностические среды – жидкие и полужидкие среды Гисса.

В эти среды добавляют углеводы (лактозу, глюкозу, мальтозу и т.д.) и различные индикаторы. В том случае, если бактерии ферментируют углевод до образования кислых продуктов, наблюдается изменение цвета среды, а если до кислоты и газа – регистрируется также появление газообразных продуктов.

3. Жидкие среды Гисса состоят из пептонной воды, 1 % углевода и индикатора Андреде (кислый фуксин, обесцвеченный щелочью). В среду опускается поплавок, который при стерилизации заполняется средой. При сбраживании сахара бактериями цвет среды в присутствии индикатора Андреде (интервал рН 7,2-6,5) изменяется от соломенно-желтого (первоначальный цвет) до ярко-розового (красного). Если кроме кислоты происходит также образование газа, он скапливается в поплавке. При отсутствии ферментации цвет среды не изменяется.

Поскольку определенный вид бактерий ферментирует не все, а только некоторые углеводы, входящие в состав сред Гисса, то наблюдается довольно пестрая картина. Поэтому набор сред с углеводами и цветным индикатором был назван " пестрым рядом ". Каждый вид бактерий характеризуется своим "пестрым рядом".

Используют короткий и длинный "пестрый ряд". К первому относятся среды Гисса с глюкозой, лактозой, сахарозой, мальтозой и спиртом маннитом. В длинный "пестрый ряд" наряду с перечисленными углеводами вводят среды с моносахаридами (арабинозой, ксилозой, рамнозой, галактозой и т.д.), полисахаридами (инулином, крахмалом, гликогеном и т.д.) и спиртами (глицерином, дульцитом, инозитом).

4. Полужидкие среды Гисса состоят из 0,2-0,5 % МПА, 1 % углевода и индикатора ВР (водно-голубая краска и розоловая кислота). Исходный цвет среды розовато-серый. При ферментации сахара цвет среды становится голубым, а при наличии и газообразования по ходу посева видны пузырьки газа, а сам агар разрывается.

Наиболее часто среды Гисса используют для дифференциальной диагностики бактерий кишечно-тифозной группы (для отличия патогенных представителей кишечно-тифозного семейства от нормальных представителей, например E. coli).

5. Для изучения бактерий кишечной группы широкое использование получили дифференциально-диагностические среды, содержащие лактозу – среды Эндо, Левина и Плоскирева. Благодаря наличию у E. coli фермента, расщепляющего лактозу, колонии этого микроба изменяют цвет среды в присутствии того или иного индикатора (на среде Эндо колонии кишечной палочки окрашиваются в красный цвет; на среде Левина – в темно-фиолетовый, на среде Плоскирева – в красный). До посева бактерий индикатор фуксин в среде Эндо обесцвечен сульфитом натрия и находится в лейкосоединении. При сбраживании лактозы образуется ацетальдегид. Он взаимодействует с сульфитом натрия, рвется двойная связь, соединяющая его с фуксином, и фуксин восстанавливается.

6. Ферментация лактозы может быть изучена при посеве культуры на молоко: обезжиренное молоко подщелачивают 10 % р-ром карбоната натрия и добавляют в качестве индикатора лакмусовую настойку, разливают по пробиркам и стерилизуют дробным методом. При росте микробов на молоке можно наблюдать подкисление или подщелачивание, свертывание или пептонизацию.

7. Для обнаружения интенсивного кислотообразования, характерного для брожения смешанного типа, используют среду Кларка (1 % глюкоза, 0,5 % пептон, индикатор – метиленовый красный). При рН 4,5 и выше он имеет желтый цвет, при более низких значениях рН – красный цвет.

8. Микроорганизмы, образующие амилазу, способны расщеплять крахмал. Об этом узнают, прибавив к культуре несколько капель р-ра Люголя. Если крахмал расщепляется, то цвет среды не изменяется. Если крахмал не расщепляется, среда с этим раствором дает синее окрашивание.

Дата добавления: 2015-07-25