Задача 9. Описать приготовление искусственных питательных сред.

Для этого надо знать:

1. МПБ готовят на мясной воде. 1 кг мясного фарша заливают 2 л водопроводной воды (она содержит минеральные соли в необходимом для бактерий количестве) и настаивают 24 часа в прохладном месте. Настой кипятят 1 час, остужают, фильтруют до прозрачности, разливают в бутыли и стерилизуют в автоклаве.

К мясной воде добавляют 1 % пептона, 0,5 % NaCl (для создания изотоничности), устанавливают рН (для большинства рН = 7,2-7,6). Затем кипятят 30 мин, добавляют дистиллированную воду до первоначального объема, фильтруют, еще раз устанавливают рН, разливают по пробиркам и колбам и стерилизуют в автоклаве при 120° С.

2. МПА готовят на основе МПБ. К МПБ добавляют 1,5-2 % сухого агара, кипятят до его полного растворения, фильтруют в горячем виде, проверяют рН, разливают по пробиркам и колбам и стерилизуют в автоклаве при 120° С.

Для получения большей поверхности культивирования готовят так называемый косой агар. Для этого пробирки сразу после стерилизации укладывают остывать в наклонном положении. При остывании агар отдает конденсационную воду, собирающуюся внизу пробирки.

3. ПВ – наиболее простая по химическому составу питательная среда. Для приготовления этой среды 1 % пептона и 0,5 % NaCl растворяют в дистиллированной воде, фильтруют и стерилизуют в автоклаве при 120° С.

4. Сложные питательные среды готовят на основе простых. Сахарные среды готовят, добавляя к МПБ или МПА 1 % глюкозу. Стерилизуют в аппарате Коха при 100° С дробным методом.

Сывороточные среды готовят, добавляя к МПБ или МПА 10-20 % стерильной сыворотки (бычьей, лошадиной и др.). МПА предварительно расплавляют на кипящей водяной бане, а затем остужают до 45-50° С и добавляют сыворотку. Сывороточные среды нельзя подвергать стерилизации, и необходимо контролировать их стерильность (ставят в термостат на 3 дня).

Для приготовления кровяного агара стерильно взятую дефибринированную кровь (кролика, барана и др.) прибавляют к стерильному расплавленному и остуженному до 45° С МПА в количестве 5-20 %, тщательно перемешивают, избегая образования пузырьков, разливают в стерильные чашки Петри или пробирки. Среду также нельзя подвергать стерилизации.

5. Приготовление других сред осуществляется по специальным рецептам. Дифференциально-диагностические среды из сухих порошков готовят следующим образом: навеску среды растворяют в дистиллированной воде и после 5-минутного кипячения разливают в стерильные чашки Петри.

6. Для контроля стерильности среды помещают в термостат при 37° С на 5 суток. Жидкие среды должны быть прозрачными, а на поверхности и в толще плотных питательных сред не должны появляться признаки роста.

Проводят также химический контроль сред (проверяют рН, содержание общего и аминного азота, хлоридов) и биологический контроль (изучают рост лабораторной культуры того микроорганизма, для которого приготовлена среда). Только после того, как среды выдержали контроль, их можно использовать по назначению.

Дата добавления: 2015-07-25