Задача 5. Охарактеризовать методы создания бескислородных условий для культивирования анаэробов.

Для этого надо знать:

1. Для культивирования анаэробов необходимо создать условия анаэробиоза – пониженного содержания кислорода в среде и окружающем пространстве. Для этого используются физические, химические и биологические методы.

2. Физические методы основаны на физических и механических способах и приемах создания бескислородных условий. Для этого:

а) осуществляют посев в глубинуплотных питательных сред (кровяной или сахарный агар): посев уколом в высокий столбик агара (анаэробы вырастают в глубине посева); посев в глубину агара в пробирках или трубках Виньяля-Вейона: берут стеклянную трубку (длиной 30 см, d = 3-6 мм), один конец трубки вытягивают в капилляр в виде пастеровской пипетки, а у другого делают перетяжку и вставляют ватную пробку; исследуемый материал засевают в пробирки с расплавленным и охлажденным агаром, а затем засеянный агар насасывают в стерильные трубки Виньяля-Вейона; капиллярный конец трубки запаивают в пламени горелки, и трубки помещают в термостат;

б) выращивают анаэробные бактерии в специальных средах, содержащих редуцирующие вещества – глюкозу, муравьинокислый натрий, а также кусочки (около 0,5 г) животных или растительных тканей (печени, селезенки, мозга, картофеля и др.).

Универсальной средой является среда Китта-Тароцци - это жидкая питательная среда, состоящая из сахарного бульона (0,5 % глюкозы) и кусочков животных тканей (например, печени, обладающей высокой способностью связывать кислород). Перед посевом из среды удаляют кислород путем кипячения в течение 10-30 минут и быстро охлаждают, а после посева заливают слоем стерильного вазелинового масла. Эта среда используется для накопления анаэробов при первичном посеве из исследуемого материала и для поддержания роста выделенной чистой культуры.

в) выращивают анаэробные микроорганизмы в сосудах, из которых удаляют воздух или заменяют его индифферентным газом (азотом, водородом, СО₂); такими сосудами могут быть анаэростат или эксикатор, куда помещают посевы на чашках Петри с кровяным или сахарным агаром.

Анаэростат – толстостенный металлический цилиндр с хорошо притертой крышкой с резиновой прокладкой, снабженный отводящим краном и вакуумметром. После размещения в анаэростате засеянных чашек Петри (крышкой вверх) из него удаляют воздух при помощи масляного насоса или вытесняют его газом из баллона (или аппарата Киппа).

3. Химические методы основаны на поглощении кислорода воздуха в герметически закрытом сосуде (аппарате Аристовского) химическими веществами (такими как щелочной пирогаллол или гидросульфит натрия).

4. Биологические методы (метод Фортнера) основаны на совместном культивировании анаэробов с аэробами (S. aureus, S. marcescens). Для этого из застывшей агаровой пластинки по диаметру чашки вырезают стерильным скальпелем полоску агара шириной 1см, получается два агаровых полудиска в одной чашке. На один из них засевают аэроб, а на другой – анаэроб. После посева чашки Петри герметически закрывают, используя пластилин или парафин (среду в чашки Петри наливают толстым слоем для сокращения воздушного пространства). Вначале в чашке Петри размножаются аэробы, а когда весь кислород в пространстве чашки будет использован, начинается рост анаэробов.

Различные метод создания анаэробиоза могут комбинироваться.

Вопросы и упражнения для самоподготовки.

1. Что такое размножение? Перечислите способы размножения бактерий.

2. Какой способ размножения наиболее распространен у бактерий?

3. Как происходит деление клетки у грамотрицательных и грамположительных бактерий?

4. Что такое аутолиз?

5. Почему у дифтерийной палочки клетки располагаются под углом друг к другу?

6. С какой скоростью размножаются разные виды бактерий?

7. От чего зависит скорость размножения бактерий?

8. Каков характер роста бактерий в жидкой питательной среде?

9. У каких микроорганизмов наблюдается поверхностный рост в жидкой среде?

10. У каких микроорганизмов наблюдается диффузный рост в жидкой среде?

11. У каких микроорганизмов наблюдается придонный рост в жидкой среде?

12. Почему прекращается рост у бактерий, если не обновлять питательную среду?

13. Что такое периодическая культура?

14. Что такое непрерывная культура?

15. Перечислите фазы роста периодической культуры в жидкой питательной среде.

16. Что такое лаг-фаза?

17. Что происходит во время логарифмической фазы роста?

18. Охарактеризуйте фазу стационарного роста.

19. Какие процессы развиваются после фазы стационарного роста?

20. Между какими клетками наблюдается равновесие в фазе стационарного роста?

21. Что такое М-концентрация, и от чего она зависит?

22. В какой фазе роста бактерии наиболее чувствительны к действию различных факторов?

23. В какой фазе роста бактериальные клетки переходят в состояние покоя?

24. Что показывает М-концентрация?

25. Каков характер роста бактерий на плотных питательных средах?

26. Что такое колония?

27. Перечислите признаки, по которым производится описание колоний?

28. Для каких бактерий внешний вид колоний является важным дифференциально-диагностическим признаком?

29. Как различаются колонии по размеру и форме?

30. Как различаются колонии по цвету и характеру поверхности?

31. Как различаются колонии по форме края, консистенции и структуре?

32. Чем обусловлена различная окраска колоний?

33. Что такое пигменты, и какие они выполняют функции в микробной клетке?

34. Какие бактерии способны к люминесценции?

35. Приведите примеры различной окраски колоний.

36. Какой внешний вид имеют колонии микоплазм?

37. Что такое дыхание?

38. Какую функцию выполняет АТФ?

39. Что такое окисление и восстановление?

40. Назовите субстраты дыхания.

41. Какие соединения могут быть акцепторами водорода?

42. Что такое анаэробное дыхание?

43. Что такое аэробное дыхание?

44. Как называется процесс, в котором органические вещества являются и донорами, и акцепторами водорода?

45. Что такое брожение?

46. Какие вещества могут сбраживаться микроорганизмами?

47. Какие продукты образуются в результате брожения?

48. Какие вы знаете виды брожения?

49. Что такое молочнокислое брожение? У каких микроорганизмов оно встречается?

50. Что такое маслянокислое брожение? У каких микроорганизмов оно встречается?

51. Какое дыхание является энергетически более выгодным?

52. Почему аэробное дыхание является энергетически более выгодным?

53. Объясните взаимосвязь между аэробным и анаэробным типами дыхания?

54. Какие микроорганизмы называются облигатными анаэробами?

55. Какие микроорганизмы называются факультативными анаэробами?

56. Что такое сульфатное дыхание?

57. Что такое нитратное дыхание?

58. Приведите примеры облигатных и факультативных анаэробов?

59. Что такое аэротолерантность?

60. Какие ферменты защищают бактерии от активных форм кислорода?

61. У каких бактерий отсутствуют каталаза, супероксиддисмутаза и пероксидаза?

62. Какие бактерии называются облигатными аэробами?

63. Какие условия необходимы для культивирования анаэробов?

64. Какие существуют методы создания анаэробных условий?

65. Перечислите физические методы создания бескислородных условий?

66. Какие вещества добавляются в среды для связывания кислорода при выращивании анаэробов?

67. Какая среда используется для выращивания анаэробов?

68. Опишите состав среды Китта-Тароцци.

69. Как осуществляется приготовление среды Китта-Тароцци?

70. Для чего используется среда Китта-Тароцци?

71. Какими способами осуществляется посев в глубину плотных питательных сред?

72. Что такое анаэростат?

73. Каким образом создаются бескислородные условия в анаэростате?

74. В чем суть химических методов создания бескислородных условий?

75. В чем суть метода Фортнера?

Дата добавления: 2015-07-25