Определение групповой принадлежности крови (система АВ0)

Читайте также:

Материальное оснащение: гемагглютинирующие сыворотки групп 0ab (I), Аb (II), Вa (III) двух различных серий, сыворотка группы АВ0 (IV), изотонический раствор NaCl, пипетки, предметные стекла или стеклянные палочки, планшет для определения групп крови, донорская кровь, игла-скарификатор одноразового пользования, спирт, вата.

Техника определения групп крови при помощи стандартных гемагглютинирующих сывороток

В верхней части планшета надписывают фамилию и инициалы лица (испытуемого или донора), у которого определяют групповую принадлежность крови. На смачиваемую белую поверхность планшета, в ячейки, надписанные обозначениями: слева - 0ab (I), в середине - Аb (II), справа - Вa (III), пипеткой наносят по одной большой капле (0,1 мл) стандартной сыворотки I, II, III групп, содержащей соответственно агглютинины I - a и b; II - b и III - a. Так как используют стандартные сыворотки двух различных серий каждой группы, то всего получается 6 капель, которые образуют два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: 0ab (I), Аb (II) и Вa (III). Сухой стеклянной палочкой или краем предметного стекла по одной маленькой капле (0,01 мл), приблизительно в 10-20 раз меньше капли сыворотки, исследуемую кровь, взятую из пальца (или донорскую кровь) переносят в ячейки рядом с каплей стандартной сыворотки. Соотношение должно быть 1: 10, т.е. 1 часть крови, 10 частей сыворотки.

Другой стеклянной палочкой (или другим краем предметного стекла) перемешивают каплю крови с сывороткой группы 0ab (I) до тех пор, пока смесь не окрасится в равномерно розовый цвет. Следующей стеклянной палочкой (другим углом стекла) перемешивают следующую каплю крови с сывороткой группы Аb (II) и также поступают с сывороткой группы и Вa (III). Так же смешивают кровь с сыворотками во втором ряду.

После размешивания капель планшет покачивают, затем на 1 минуту оставляют в покое и снова периодически покачивают. Наблюдение за ходом реакции производят при легком покачивании планшета в течение 5 минут. Агглютинация наступает обычно в течение первых 19-30 секунд, однако наблюдение производят не менее 5 минут ввиду возможности позднего наступления агглютинации в случае слабой агглютинабельности эритроцитов (А₂ или А₂В).

Результат реакции в каждой капле может быть положительным (+) или отрицательным (-).

Положительный результат (+) выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов; агглютинаты видны невооруженным глазом сначала в виде мелких красных зернышек, постепенно сливающихся в более крупные хлопья. При этом сыворотка постепенно обесцвечивается. По мере наступления агглютинации, но не ранее 3 минут, в эти капли добавляют по одной большой капле (0,1 мл) физиологического раствора NaCl для разрушения иногда наступающей ложной агглютинации - неспецифического склеивания эритроцитов в так называемые монетные столбики. Планшет покачивают и продолжают исследование до истечения 5 минут.

В тех случаях, когда положительный результат получается со стандартными сыворотками всех трех групп (во всех каплях), для исключения неспецифической агглютинации проводится дополнительное исследование испытуемых эритроцитов со стандартной сывороткой группы АВ₀ (IV), не содержащей групповых агглютининов. Для этого на поверхность 7-й ячейки наносят одну большую каплю (0,1 мл) сыворотки группы АВ₀ (IV) и рядом - маленькую каплю (0,01 мл) крови. Кровь смешивают с сывороткой и при покачивании планшета исследуют реакцию в течение 5 минут. Лишь отсутствие агглютинации с сывороткой группы АВ₀ (IV) позволяет учесть положительный результат реакции с сыворотками 0ab (I), Аb (II) и Вa (III) как истинный.

Группу крови устанавливают в зависимости от наличия или отсутствия реакции изогемагглютинации. Оценку результата см. на рисунке 1.

Результаты реакций в каплях с сыворотками могут дать четыре различных комбинации положительных и отрицательных реакций.

1. Если сыворотки всех трех групп дали отрицательную реакцию, т.е. все смеси остались равномерно окрашенными в розовый цвет без признаков агглютинации, то испытуемая кровь не содержит агглютиногенов и, следовательно, принадлежит к группе 0ab (I).

2. Если сыворотки групп 0ab (I) и Вa (III) дали положительную реакцию, а сыворотка группы Аb (II) - отрицательную, то испытуемая кровь содержит агглютиноген А и эта кровь принадлежит к группе Аb (II).

3. Если сыворотки групп 0ab (I) и Аb (II) дали положительную реакцию, а сыворотка группы Вa (III) - отрицательную, то испытуемая кровь содержит агглютиноген В, т.е. принадлежит к группе Вa (III).

4. Если сыворотки всех трех групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что испытуемая кровь содержит оба агглютиногена - А и В - и принадлежит к группе АВ₀ (IV) при условии, что в течение 5 минут кровь этой группы с сывороткой группы АВ₀ (IV) в 7-й ячейке не дала агглютинации.

Выражение практического результата:

Группу крови записывают по общепринятым в странах СНГ правилам с обязательным указаниям буквенного обозначения выявленных агглютиногенов (агглютиногена), затем - агглютининов и в скобках римской цифрой - группа. Например, группа крови Иванова И.П. - 0ab (I), или Аb (II), или Вa (III), или АВ₀ (IV).

Результат реакции со стандартными сыворотками групп	Исследуемая кровь принадлежит к группе
Oab	Ab	Ba
(-)	(-)		O(I)
(-)	(-)	(-)

(+)	(-)	(+)	A(II)
(+)		(+)

(+)	(+)	(-)	B(III)
(+)	(+)	(-)

(+)	(+)	(+)	AB(IV)
(+)	(+)	(+)
Контроль с сывороткой группы AB(IV) (-)